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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活
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songtuo1987

新虫 (初入文坛)

[求助] 如何用DNS法测α-淀粉酶酶活

请问各位大仙，有谁知道如何用DNS法测α-淀粉酶酶活吗？小弟最近正愁这事呢，有人知道的话，教小弟具体步骤吧，急
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1楼2012-06-07 16:19:05
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pan2qfly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by protein_ at 2012-06-08 10:17:16
取1mL酶液于试管中，70℃保温15min，迅速冷却后，在40℃下预热15min，然后加入2mL40℃预热好的1%可溶性淀粉，摇匀后40℃下反应5min，迅速冷却并加入4mL0.4M氢氧化钠终止反应，然后取1mL反应液于试管中，加入1mLDNS， ...

请问答主，做α淀粉酶的粗酶液时，加入柠檬酸-柠檬酸钠-缓冲液并研磨后，是常温提取还是放4℃冰箱提取？生物化学书上的案例是常温振荡提取的，有些文献是放4℃冰箱提取1h。请问你用的哪一种？
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21楼2021-03-05 15:20:45
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pan2qfly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by My-life at 2016-01-06 11:58:34
α-淀粉酶活性（麦芽糖mg/g）=(A-a)*V/W*V0
   A:α-淀粉酶水解淀粉生成的麦芽糖量
  a：α-淀粉酶对照管中麦芽糖量
V：样品稀释体积
V0：比色时所取样品毫升数...

请问答主，为什么最后要除以V0？只要测OD值时取的毫升数与做标曲时相同，那还需要除以V0吗？
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22楼2021-03-05 15:27:49
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pan2qfly

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by protein_ at 2012-06-08 10:17:16
取1mL酶液于试管中，70℃保温15min，迅速冷却后，在40℃下预热15min，然后加入2mL40℃预热好的1%可溶性淀粉，摇匀后40℃下反应5min，迅速冷却并加入4mL0.4M氢氧化钠终止反应，然后取1mL反应液于试管中，加入1mLDNS， ...

与赵亚华老师的《生物化学与分子生物学实验技术教程》内的步骤相同，书上定容的是“至25ml”，你的至15ml。大家可参考
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23楼2021-03-12 17:20:49
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