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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 穿刺保藏的菌被冻在-80度冰箱会不会有影响？
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luba

新虫 (小有名气)

[求助] 穿刺保藏的菌被冻在-80度冰箱会不会有影响？

我在公司合成的基因，人家昨天下午送来的一管穿刺保藏菌，我给冻在-80度冻了一天。昨晚蘸了一下划了个平板，今早看发现长的很少很慢，觉得不对劲，上网一查发现穿刺保藏菌是应该冻4度的。刚刚把它拿出来放到4度了。不知道会有影响不？菌里的序列会不会有突变什么的啊？5600多块钱合成的基因呢，不要就这么被我毁了。。。
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1楼 2012-06-07 11:34:31
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yhjcwangyw

铁杆木虫 (正式写手)
穿刺保藏和斜面保藏是一个道理，只是穿刺保藏是厌氧菌，斜面保藏是蓄养氧菌，因此放到零下80的冰箱里，肯定影响。零下80一般是用甘油做的冻干管菌种保藏，因为在超低温下甘油可以保护菌体不受损伤。
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2楼2012-06-08 09:48:09
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
luba: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2012-06-11 12:34:18
细菌在低温下如果没有保护剂，会死得很快，只能期待人品好了。现在长得很慢，但好歹是长了，长了就行，质粒在细菌里大概是不受影响的，菌长了，只要加了选择性压力，质粒也会扩增的。至于担心序列变化，等菌体长好了送测看序列就行。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2012-06-09 04:40:01
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luba

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-06-09 04:40:01
细菌在低温下如果没有保护剂，会死得很快，只能期待人品好了。现在长得很慢，但好歹是长了，长了就行，质粒在细菌里大概是不受影响的，菌长了，只要加了选择性压力，质粒也会扩增的。至于担心序列变化，等菌体长好了 ...

谢谢，不过我还有疑问，一般用的不都是大肠杆菌吗？为什么要用厌氧菌的保藏方法？它缺氧了不也得死吗？还有我用这个菌划线时该怎么划呢？为什么我划出来的长的很少？是应该蘸一下就行还是要把菌和琼脂混匀了再划？如果混匀了岂不是又起不到厌氧的效果了？唉，真是搞死我了。。。。
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4楼2012-06-11 12:36:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
4楼: Originally posted by luba at 2012-06-11 12:36:52
谢谢，不过我还有疑问，一般用的不都是大肠杆菌吗？为什么要用厌氧菌的保藏方法？它缺氧了不也得死吗？还有我用这个菌划线时该怎么划呢？为什么我划出来的长的很少？是应该蘸一下就行还是要把菌和琼脂混匀了再划？ ...

大肠杆菌是兼性厌氧的，不用担心。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-06-11 12:39:31
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