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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » RNA 电泳图
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小小虫2012

新虫 (初入文坛)

[求助] RNA 电泳图

这两张图片是我最近做的果实总RNA提取的电泳图，不知道是什么原因最上面都出现了一条带，希望高手能帮我指点指点，还有从图上可以看到的其他问题也希望帮我一并指出，不胜感激。注：5ulRNA溶液+1ul Loading Buffer    110V   40分钟





[ Last edited by 小小虫2012 on 2012-6-1 at 12:17 ]
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1楼2012-06-01 12:00:53
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linyanfei

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 欢迎常来交流~ 2012-06-02 10:32:20
你提的RNA严重降解了，RNA本来就要用DEPC水溶解，否则容易降解。你的LiCl浓度用的还是有点高 ，我们一般都用8M就足够了！关于基因组DNA，你可以用DNA酶消化，再抽提就可以了
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6楼2012-06-01 21:24:46
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 欢迎常来，呵呵~ 2012-06-02 10:32:33
上面那条带应该是基因组dna污染。
正确的步骤应该是跑胶之前，先定一下量，调整好浓度才跑胶，并且要关注A260/280比值。
你的RNA首先太浓，上样太多，其次有降解，不能算是合格的rna，需要继续努力
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2楼2012-06-01 14:26:23
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小小虫2012

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-06-01 14:26:23
上面那条带应该是基因组dna污染。
正确的步骤应该是跑胶之前，先定一下量，调整好浓度才跑胶，并且要关注A260/280比值。
你的RNA首先太浓，上样太多，其次有降解，不能算是合格的rna，需要继续努力

首先要谢谢你，我还不是很明白为什么会有基因组的污染，我是CTAB法提的RNA，用12M 的LiCl沉降RNA12小时，以前做的时候没有出现基因组的污染，不知道这是不是因为沉降时间太久了？关于RNA浓度的问题我想了解一下大概什么个范围算好，就此图而言，是不是加样31ul 就好了？非常感谢
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3楼2012-06-01 16:39:32
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

去除基因组DNA污染，可以加DNase消化除去之；
你定量的时候看看浓度，其实RNA能有个几十ng就足足可以在胶上看到了，太多了也浪费
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4楼2012-06-01 16:56:22
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