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zhannanxia

银虫 (小有名气)

[求助] 已经克隆测序到了matK序列,如何界定?急切求助中,谢谢!

大侠们好,我这边有两个问题帮忙解疑下:
1.我已经通过克隆测序,获得了20几个不同样品的matK序列,大小在700多bp,而NCBI上比对的matK序列有的达到1500bp左右(全基因序列),请问现在要怎么人工剪辑?就是如何确定我克隆到的基因序列长度,用来序列差异分析和构建系统发育树。
2.同上,基因序列长度如何确定,用于genebank的提交?
3.比如苹果“红富士”,这个品种之前有人已经在NCBI上提交过matK的核苷酸序列,我现在重新测序的和前人略有不同,还可以申请提交吗?
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zhannanxia

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by linyanfei at 2012-06-01 21:30:31
你的matK是什么基因呀?你用你的上下游引物比对了后,剪切掉载体上的序列,剩下的就是你的目的序列了!还有,如果你的cDNA序列只是同别人的序列只差几个碱基的话那你就要慎重了,有可能是碱基错配造成的,最好是比对 ...

谢谢楼上的回复,那么请问:
如《基于rbcL、matK基因序列探讨松科系统进化的可能性。。。》这篇文章中,克隆rbcL基因所用引物为正向---5‘-ATGTCACCAAAAACAGAGACT-3’
反向----5‘TCACAAGCAGCAGCTAGTTC-3’。他提交到NCBI上的一条序列编号AY389136,
序列是 1 gtcggattca aagctggtgt taaagattac agattaactt attatactcc tgaatatcag
       61 accaaagata cggatatctt ggcagcattc cgagtaactc ctcaacctgg ggtgccgccc
      121 gaggaagcgg gagcagcagt agctgctgaa tcttccaccg gtacatggac cactgtttgg
      181 accgatggac ttactagtct tgatcgttac aagggacgat gctatgacat cgaggccgtt
      241 cctggagagg agagtcaatt tattgcctat gtagcttacc ccttagacct tttcgaagaa
      301 ggttctgtta ctaacttgtt cacttccatt gtaggtaatg tatttggatt caaggcccta
      361 cgggctctac gtttggaaga tttgcggatc ccccctgctt attccaaaac ttttcaaggt
      421 ccacctcatg gtatccaagt cgaaagggat aaattgaaca aatatggccg tcctttattg
      481 ggatgtacta tcaaaccaaa attgggtcta tcggctaaga actatggtag agcagtttac
      541 gaatgtctcc gtggtggact cgattttacc aaggatgatg agaacgtaaa ttcccaacca
      601 ttcatgcgct ggagagatcg ttttgtcttt tgtgcggaag caatttataa ggctcaggct
      661 gagacgggtg aaattaaggg acattacttg aatgctactg caggtacatg tgaagaaatg
      721 atgaaaaggg cagtatttgc aagagaattg ggagttccta tcgttatgca tgactatctg
      781 acgggaggtt ttactgcaaa tacttctttg gctcattatt gccgagacaa cggcctactt
      841 cttcacattc accgcgcgat gcatgcagtt attgacagac aaagaaatca tggcatgcat
      901 ttccgtgtac tggctaaagc attgcgtatg tccggtggag atcatattca cgccggtact
      961 gtagtaggta aacttgaagg ggaacgagaa gtcactttag ggtttgttga tctactgcgt
     1021 gatgatttta ttgaaaaaga tcgaagtcgt ggtatttact tcactcaaga ctgggtatct
     1081 atgccaggtg ttctgcccgt agcttcagga ggtattcacg tttggcatat gcctgctctg
     1141 accgagatct ttggggatga ttccgtacta cagtttggtg ggggaacttt ggggcaccct
     1201 tggggaaatg cgcctggtgc agtagctaat cgggttgctc tagaagcttg tgtacaagct
     1261 cgtaatgaag gacgtgatct tgctcgtgaa ggtaatgaag tgatccgtga agct
//
从这里看不到引物的序列,这个是怎么解释?即序列提交时候以什么为准,比如从上下游引物开始信息都算,或者其它?
5楼2012-06-04 00:13:06
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zhannanxia

银虫 (小有名气)

不知道描述详尽不,
自己再顶一下,
2楼2012-06-01 16:40:37
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linyanfei

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 有道理~ 2012-06-02 10:31:01
zhannanxia: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-06-04 10:48:07
你的matK是什么基因呀?你用你的上下游引物比对了后,剪切掉载体上的序列,剩下的就是你的目的序列了!还有,如果你的cDNA序列只是同别人的序列只差几个碱基的话那你就要慎重了,有可能是碱基错配造成的,最好是比对一下氨基酸序列!如果氨基酸序列不一样的话,还可以考虑,如果氨基酸序列完全一样的话那就没有必要了!
3楼2012-06-01 21:30:31
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 有帮助~只选取已有的序列做比对 2012-06-02 10:31:25
zhannanxia: 金币+2, 有帮助 2012-06-04 10:47:30
如要建系统发育树,那你需要截取NCBI上相关序列的相应区域,然后再作比对建树。可以先把你的序列和NCBI的一起做个多序列比对,然后根据结果截取各序列的相应片段,再重新做多序列比对建树。
4楼2012-06-02 00:45:34
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