应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 想获得较大量的pBR322，却怎么也提不出来，各位大侠帮帮忙……
51/1返回列表
查看: 2012  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Janual

银虫 (小有名气)

[求助] 想获得较大量的pBR322，却怎么也提不出来，各位大侠帮帮忙……

我把质粒转入大肠杆菌，然后摇床扩增，按照分子生物学克隆指南的中提步骤做，加入异丙醇后，离心，有沉淀，而且不少，乙醇洗，开始还有沉淀，但是等它挥发干的时候，沉淀好像不见了。就算沉淀还在，电泳后，也没有条带。很悲剧啊，重复了两次了。这是为什么呢？平板含有氨苄，试管扩增时也有氨苄，三角瓶扩增时也加了氨苄，菌液浓度比较好。跟我之前用小提试剂盒提时养的菌是一样的
为什么提不出来？
各位大侠，我要怎么样才能获得较大量的质粒呢？万分感激！！！
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Janual

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-30 00:26:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Janual at 2012-05-30 22:14:51
异戊醇沉淀后，干燥时间久一点，沉淀就会溶解掉。乙醇干燥也一样。。。请问正常吗？
另外，我看很多贴子，我也想了很久，我想有可能是我配的饱和苯酚的问题。我今天又重新配了，但是无论怎么样，我好像都调不到8. ...

提质粒怎么会用到Tris饱和酚呢》？那个似乎是提基因组DNA时候才用的吧？提质粒是P1，P2和P3。
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-30 22:29:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

XOooZzz

银虫 (小有名气)
用乙醇洗时刚开始有沉淀，后来没有了？？干燥后的DNA应该像一小块保鲜膜一样贴在离心管底部。溶解后的DNA溶液明显比水粘稠。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Janual
3楼2012-05-30 10:22:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

早冰124

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-30 13:43:12
我们提质粒都是用试剂盒的，一般要获取大量的质粒会增大裂解液buffer p1的用量，裂解时间也稍稍长些，3-4min, 后面的中和反应液也相对加大，即buffer p1 到buffer p3都相应的加大量，当然这前提是你菌体要养的足够多。现在也有质粒小题中量提取试剂盒，可以试试
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

Janual
4楼2012-05-30 11:05:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Janual

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by XOooZzz at 2012-05-30 10:22:22
用乙醇洗时刚开始有沉淀，后来没有了？？干燥后的DNA应该像一小块保鲜膜一样贴在离心管底部。溶解后的DNA溶液明显比水粘稠。

异戊醇沉淀后，干燥时间久一点，沉淀就会溶解掉。乙醇干燥也一样。。。请问正常吗？
另外，我看很多贴子，我也想了很久，我想有可能是我配的饱和苯酚的问题。我今天又重新配了，但是无论怎么样，我好像都调不到8.0。。。而且tris加多了，水相竟没有了。。。ph计测，好像到了8.5.。。不知道有没有问题。。。
今晚我又重新提了，明天测结果。。
赞一下 回复此楼
5楼2012-05-30 22:14:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +16 羊腰板 2026-08-21 17/850 2026-08-23 23:02 by tianxiaochun
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +12 大萍1987 2026-08-20 15/750 2026-08-23 20:44 by 大萍1987
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 什么时候开奖？ +9 CrisMessi 2026-08-18 10/500 2026-08-23 12:03 by 丶昵称占用
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭