24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hraikeyan

金虫 (小有名气)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 621.2
散金: 81
红花: 3
帖子: 243
在线: 125.3小时
虫号: 1417102
注册: 2011-09-25
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

[求助] 克隆目的基因

一直在从一个全基因组不知道的菌种克隆目的基因，最近根据同源性设计了兼并引物。现在遇到了以下这些问题：
1.用兼并引物P目的片段时，使用梯度PCR做的，确定退火温度在58—65之间都有条带，最后回收胶，做连接，转化，蓝白斑筛选，挑了18个白斑进行菌落PCR，发现没有目标条带。（注：因为是新手，切胶回收时切得有些宽，师姐说可能回收率太低）
2.介于上次失败，所以就从头开始做一次克隆，所选的退火温度是62℃。但是这次居然没有P出来。

只有一条很淡的条带，这也没法回收啊。
所以请高手指点一下啦。万分感谢。

回复此楼

» 猜你喜欢

GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner 已经有0人回复
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner 已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有84人回复
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner 已经有0人回复
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂已经有0人回复
DMXAA：从血管破坏剂到STING通路研究的关键工具分子 | Biochempartner 已经有0人回复
靶向PD-L1的人源化单克隆抗体阿特珠单抗已经有0人回复
"探针之父"(+)-JQ-1如何改变表观遗传研究 | Biochempartner 已经有0人回复
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松已经有0人回复
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析已经有0人回复
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

nothing isimpossible

1楼 2012-05-27 22:43:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

trizol11

木虫 (正式写手)

应助: 47 (小学生)
金币: 2714.2
散金: 199
红花: 3
帖子: 572
在线: 172.8小时
虫号: 1711824
注册: 2012-03-23
性别: GG
专业: 兽医药理学与毒理学

引用回帖:

8楼: Originally posted by hraikeyan at 2012-05-28 21:40:08
我做的是菌落PCR。
95℃    5min
95℃    1min 30个循环
63℃    1min 30个循环
72℃    1min30s 30个循环
72℃    10min
4℃       ------...

谢谢，战友

回复此楼