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sunxiao1987

新虫 (初入文坛)

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[交流] WB显影结果分析

我所做蛋白，说明书上说分子量为70KD。发表的文章上作出的分子量也不是很一致，有的在80KD，有的90KD，还有100KD，样本都是大鼠的。师姐用细胞样品做现出来的条带在70-100KD间属于正常范围内，我做是大鼠样本，每次WB显影出的条带分子量都稍微小于70KD，与实际分子量有点不符，我跟师姐所用抗体浓度一样，不知道所显出来的条带是不是我的目的条带呢？

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1楼2012-05-24 14:24:38

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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

★ ★ ★ ★
sunxiao1987: 金币+1, 很有道理哈 2012-05-25 12:28:00
小丹木木: 金币+3, 辛苦！ 2012-05-25 13:48:48

不可能与胶浓度有关系就能够达到80-100KD的分子量差异，一个氨基酸残基才110D，差20KD的分子量的蛋白质的一级结构肯定不同，一般不可能有如此大分子量的侧链修饰。除非是糖蛋白，有可能糖分子的含量能够到达30%，而在不同的提取过程中，很可能糖链的保留情况很不相同，或者在细胞中糖链就呈现极大的多样性，因此无法认定那种糖蛋白质是标准蛋白质，如果不是糖蛋白，那么即使SDS-PAGE测定的蛋白质的分子量达到80-100KD的分子量差异，这是SDS-PAGE测定该蛋白质的线型分子量规律已经被打破，也就是不能用电泳在测定分子量了，那么也就必须用质谱重新测定分子量，质谱测定同种蛋白质不可能出现如此的差异。