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sunxiao1987

新虫 (初入文坛)


[交流] WB显影结果分析

我所做蛋白,说明书上说分子量为70KD。发表的文章上作出的分子量也不是很一致,有的在80KD,有的90KD,还有100KD,样本都是大鼠的。师姐用细胞样品做现出来的条带在70-100KD间属于正常范围内,我做是大鼠样本,每次WB显影出的条带分子量都稍微小于70KD,与实际分子量有点不符,我跟师姐所用抗体浓度一样,不知道所显出来的条带是不是我的目的条带呢?
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★ ★ ★ ★
sunxiao1987: 金币+1, 很有道理哈 2012-05-25 12:28:00
小丹木木: 金币+3, 辛苦! 2012-05-25 13:48:48
不可能与胶浓度有关系就能够达到80-100KD的分子量差异,一个氨基酸残基才110D,差20KD的分子量的蛋白质的一级结构肯定不同,一般不可能有如此大分子量的侧链修饰。除非是糖蛋白,有可能糖分子的含量能够到达30%,而在不同的提取过程中,很可能糖链的保留情况很不相同,或者在细胞中糖链就呈现极大的多样性,因此无法认定那种糖蛋白质是标准蛋白质,如果不是糖蛋白,那么即使SDS-PAGE测定的蛋白质的分子量达到80-100KD的分子量差异,这是SDS-PAGE测定该蛋白质的线型分子量规律已经被打破,也就是不能用电泳在测定分子量了,那么也就必须用质谱重新测定分子量,质谱测定同种蛋白质不可能出现如此的差异。
11楼2012-05-25 10:23:38
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aixia5

金虫 (小有名气)


★
sunxiao1987(金币+1): 谢谢参与
有钱的话,可以送去测氨基酸序列,不过费用特别高,不是一般实验室能接受的。
3楼2012-05-24 16:03:40
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flownaway

铁杆木虫 (正式写手)


★
sunxiao1987(金币+1): 谢谢参与
是不是蛋白发生变性造成的?
5楼2012-05-24 22:31:37
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★ ★ ★
sunxiao1987(金币+1): 谢谢参与
西瓜: 金币+2, Good!辛苦哈~ 2012-05-24 23:45:27
做个质谱测两者分子量,再分别用用红外和紫外测一下两者的二级和三级结构,比较一下就可以知道。以Ediman降解为原理的自动多肽测序仪一般无法直接测定多肽的氨基酸侧链修饰,用质谱测序能够测出,但是那样测序比用自动测序仪还贵,用质谱测蛋白质的分子量并不贵。
6楼2012-05-24 23:20:15
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