24小时热门版块排行榜    

查看: 2246  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

梦-妖精

铁虫 (初入文坛)

[求助] 关于RNA反转录

我们实验反转录的试剂盒是Reverse Transcriptase M-MLV(RNase H-)TaKaRa 宝生物工程(大连)有限公司  里面只有5xM-MLV Buffer和RTase M-MLV(RNase H-)这两种试剂,其他的Oligo(dT)和dNTP Mixture都没有,我们之前有个别的试剂盒,里面有这两样,但是后面的(μM)不一样,这样反转录的还可以吗???比如,要求的Oligo(dT)12-18 Primer (50μM),而我有的只是10μM,前者加一微升,后者加5微升,就一样了吗???还是怎么样子?最后真的有必要检测cDNA吗,好茫然啊~(提取的是两栖类的RNA,质量还可以,有明显的两条带)
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zqx128

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 梦-妖精 at 2012-05-23 14:59:56
可是那样的话,整个体积就又变了啊,完全和试剂盒里要求的体积不一样了,那样会有影响吗???...

可以通过水的用量来调整体系的总量不变,如果还是调不过来,总量有点差别也不会影响太大。
8楼2012-05-27 15:10:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助,今天很有空哦 2012-05-23 14:08:51
嗯.....................
       当然可以啊 10uM多加4倍体积就成了50uM啦
       没有必要检测cDNA 因为普通方法你也没法检测 如果不放心参照某些文献设计引物做3‘/5’完整度实验这是通用的检测cDNA方法
       个人看法 若有说错请高手指点
Let God do with it as He wills
2楼2012-05-23 12:53:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦-妖精

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-05-23 12:53:39:
嗯.....................
       当然可以啊 10uM多加4倍体积就成了50uM啦
       没有必要检测cDNA 因为普通方法你也没法检测 如果不放心参照某些文献设计引物做3‘/5’完整度实验这是通用的检测cDNA方法

可是那样的话,整个体积就又变了啊,完全和试剂盒里要求的体积不一样了,那样会有影响吗???
3楼2012-05-23 14:59:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-23 20:51:38
检测cDNA,可以用Q3000测下浓度与吸光度值嘛。反转录的时候注意灭火一下就可以了,楼上已经回答的很详细了,个人感觉不必拘泥于试剂盒说明书剂量,体系的选择有可能要在试剂盒的基础上做改变的
4楼2012-05-23 17:28:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +8 Kittylucky 2026-08-27 8/400 2026-08-27 18:33 by raiy123
[基金申请] 基金不中,共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 面上合作单位盖章 +3 ssyjh 2026-08-27 3/150 2026-08-27 09:59 by 阿拉贡aragon
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 17/850 2026-08-27 08:20 by 大萍1987
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 人气不行了 +11 fansofjerry 2026-08-21 11/550 2026-08-25 11:04 by 孤独的英雄6
信息提示
请填处理意见