应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 黄孢子原毛平革菌木素过氧化物酶，锰过氧化物酶，漆酶酶活测定
51/1返回列表
查看: 5610  |  回复: 58
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

fanxiaojuan

金虫 (小有名气)

[交流] 黄孢子原毛平革菌木素过氧化物酶，锰过氧化物酶，漆酶酶活测定

我用的方法如下：
    木素过氧化物酶（LiP）测定：取 0.2mL 藜芦醇溶液（10mmol•L-1）、0.4mL 酒石酸缓冲液（250mmol•L-1，pH=3.0）与 0.4mL 粗酶液混匀，即得 1mL 反应液。在 30℃下，于反应液中加 20μLH2O2溶液（20mmol•L-1）启动酶促反应，以未加启动因子的反应液为参比，用紫外分光光度计（UV-2550）测定 310nm 处 2min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化藜芦醇产生 1μmol藜芦醛所需的酶量。
    锰过氧化物酶（MnP）测定：将 0.2113g MnSO4溶解于 1L 酒石酸缓冲液（50mmol•L-1，pH=4.5）中，取 0.8mL 该溶液同 0.2mL 粗酶液混匀，即得 1mL 反应液。在 30℃下，于反应液中加 20μLH2O2溶液（20mmol•L-1）启动酶促反应，以未加启动因子的反应液为参比，用紫外分光光度计（UV-2550）测定 290nm 处2min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化 Mn2+产生 1μmol Mn3+所需的酶量。
    漆酶采用ABTS法
但测出吸光度是负值，请大家帮忙分析一下并提出宝贵意见，还有不解的是怎么把吸光度的变化转化为酶活，还有就是测定2min钟前后的吸光度变化，这两分钟怎么选取，随便选取两分钟即可吗，或者大家有没有测这几种酶的具体方法，能否分享一下，拜托各位了！

[ Last edited by fanxiaojuan on 2012-5-17 at 17:05 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生工检测理论与实务

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-05-17 17:02:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a且歌且行a

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
fanxiaojuan: 金币+2 2012-05-21 14:06:01
漆酶酶活测定：
以愈创木酚为底物，3mL反应混合液中，含50mmol/L琥珀酸钠缓冲液（pH=4.5），1mmol/L底物和0.6mL粗酶液（发酵液经10000 r/min离心10min后取上清液作为粗酶液），30℃水浴保温反应30min后，于465nm处测定吸光度。以酶液事先灭活的反应混合液为对照，酶活定义：以1min内催化氧化1μmol愈创木酚的量为1个酶活单位（U）。
赞一下 回复此楼
38楼2012-05-20 21:29:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 59 个回答

yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
得金币了，说声谢谢！
赞一下 回复此楼
13楼2012-05-17 19:05:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

啄虫鸟

新虫 (著名写手)
★
fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
闲来逛逛……
回复此楼
14楼2012-05-17 19:09:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
liushuyan6楼
2012-05-17 18:49   回复  
fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
86739294910楼
2012-05-17 18:54   回复  
引用回帖:
4楼: Originally posted by sesame_oil at 2012-05-17 18:39:31:

查看全部 59 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭