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黄孢子原毛平革菌木素过氧化物酶，锰过氧化物酶，漆酶酶活测定
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我用的方法如下： 木素过氧化物酶（LiP）测定：取 0.2mL 藜芦醇溶液（10mmol•L-1）、0.4mL 酒石酸缓冲液（250mmol•L-1，pH=3.0）与 0.4mL 粗酶液混匀，即得 1mL 反应液。在 30℃下，于反应液中加 20μLH2O2溶液（20mmol•L-1）启动酶促反应，以未加启动因子的反应液为参比，用紫外分光光度计（UV-2550）测定 310nm 处 2min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化藜芦醇产生 1μmol藜芦醛所需的酶量。 锰过氧化物酶（MnP）测定：将 0.2113g MnSO4溶解于 1L 酒石酸缓冲液（50mmol•L-1，pH=4.5）中，取 0.8mL 该溶液同 0.2mL 粗酶液混匀，即得 1mL 反应液。在 30℃下，于反应液中加 20μLH2O2溶液（20mmol•L-1）启动酶促反应，以未加启动因子的反应液为参比，用紫外分光光度计（UV-2550）测定 290nm 处2min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化 Mn2+产生 1μmol Mn3+所需的酶量。 漆酶采用ABTS法 但测出吸光度是负值，请大家帮忙分析一下并提出宝贵意见，还有不解的是怎么把吸光度的变化转化为酶活，还有就是测定2min钟前后的吸光度变化，这两分钟怎么选取，随便选取两分钟即可吗，或者大家有没有测这几种酶的具体方法，能否分享一下，拜托各位了！ [ Last edited by fanxiaojuan on 2012-5-17 at 17:05 ] |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
fanxiaojuan: 金币+2, 好的，谢谢哦 2012-05-19 18:18:23
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
fanxiaojuan: 金币+2, 好的，谢谢哦 2012-05-19 18:18:23
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我们实验室常用的方法，这是师姐论文上用的。我还没有做过，具体操作部是很清楚，不过听说这东西测出来参差不齐的，兄台好好摸索吧，祝你成功，相互交流。 1.漆酶(Lac)活性的测定 于0.05mol/LpH4.0的醋酸缓冲液3.5ml中，加入3.36mmol/L的邻联甲苯胺0.5ml(95%的乙醇溶液)，再加入稀释50倍的酶液0.5ml，30℃反应3min后于600nm处比色测定。酶定义为每分钟每毫升使OD600值改变0.001为一个酶活力单位。 2.木质素过氧化物酶(Lip)活性的测定 亚甲基蓝法:0.1ml的1.2mmol/L的亚甲基蓝，0.6ml的0.5mol/L的酒石酸钠缓冲成分，（PH4.0），2.2ml稀释50倍的酶液，加0.1ml的2.7mmol/的H2O2启动反应。酶定义为每分钟每毫升使OD664值改变0.001为一个酶活力单位。 |
37楼2012-05-19 17:25:44
13楼2012-05-17 19:05:12
闲来逛逛……14楼2012-05-17 19:09:05
简单回复
2012-05-17 18:49
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fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
86739294910楼
2012-05-17 18:54
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