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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 黄孢子原毛平革菌木素过氧化物酶，锰过氧化物酶，漆酶酶活测定
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fanxiaojuan

金虫 (小有名气)

[交流] 黄孢子原毛平革菌木素过氧化物酶，锰过氧化物酶，漆酶酶活测定

我用的方法如下：
    木素过氧化物酶（LiP）测定：取 0.2mL 藜芦醇溶液（10mmol•L-1）、0.4mL 酒石酸缓冲液（250mmol•L-1，pH=3.0）与 0.4mL 粗酶液混匀，即得 1mL 反应液。在 30℃下，于反应液中加 20μLH2O2溶液（20mmol•L-1）启动酶促反应，以未加启动因子的反应液为参比，用紫外分光光度计（UV-2550）测定 310nm 处 2min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化藜芦醇产生 1μmol藜芦醛所需的酶量。
    锰过氧化物酶（MnP）测定：将 0.2113g MnSO4溶解于 1L 酒石酸缓冲液（50mmol•L-1，pH=4.5）中，取 0.8mL 该溶液同 0.2mL 粗酶液混匀，即得 1mL 反应液。在 30℃下，于反应液中加 20μLH2O2溶液（20mmol•L-1）启动酶促反应，以未加启动因子的反应液为参比，用紫外分光光度计（UV-2550）测定 290nm 处2min 前后反应液吸光度的变化。一个酶活力单位（U）定义为每分钟氧化 Mn2+产生 1μmol Mn3+所需的酶量。
    漆酶采用ABTS法
但测出吸光度是负值，请大家帮忙分析一下并提出宝贵意见，还有不解的是怎么把吸光度的变化转化为酶活，还有就是测定2min钟前后的吸光度变化，这两分钟怎么选取，随便选取两分钟即可吗，或者大家有没有测这几种酶的具体方法，能否分享一下，拜托各位了！

[ Last edited by fanxiaojuan on 2012-5-17 at 17:05 ]
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1楼 2012-05-17 17:02:11
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xiao7270

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
fanxiaojuan: 金币+1, 有帮助 2012-05-18 14:16:04
1. 测定波长在紫外区的时候用石英比色皿，可见光区用玻璃比色皿。
2. 仪器调零用纯水，对照组应该是缓冲液。
3. 测定的液体里面有没有气泡？无论是对照还是样品的液体里有气泡就会严重影响测定结果，出负数还是小状况。
4. 混匀你的样品和对照，液体不匀时也有可能出负数。
赞一下(1人) 回复此楼
30楼2012-05-18 12:27:32
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yuanyeguhong

至尊木虫 (文坛精英)
★
fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
得金币了，说声谢谢！
赞一下 回复此楼
13楼2012-05-17 19:05:12
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啄虫鸟

新虫 (著名写手)
★
fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
闲来逛逛……
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14楼2012-05-17 19:09:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
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liushuyan6楼
2012-05-17 18:49   回复  
fanxiaojuan(金币+1): 谢谢参与
86739294910楼
2012-05-17 18:54   回复  
引用回帖:
4楼: Originally posted by sesame_oil at 2012-05-17 18:39:31:

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