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thestormcong银虫 (小有名气)
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[求助]
酶活测定
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大家好！小弟现在想测我自己从胞内裂解出来的粗酶液的酶活。可是不知道如何确定底物和酶的量，是不是底物要过量？我是用分光光度计测定产物生成量来计算酶活的。怎么样摸索这个量呢？还有消光系数跟OD值和酶有什么关系呢？ 小弟接触酶学不久，还有很多不清楚的地方，希望得到有经验的虫友的帮助，非常感谢！ |
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 基因工程、分子技术、微生物理论 |
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Enzyme Assays----A Practical Approach(2002). http://ishare.iask.sina.com.cn/f/24494635.html 参考一下吧。 |
thestormcong10楼2012-05-18 13:11:37
crazymouse66
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thestormcong: 金币+3, ★有帮助 2012-05-14 18:38:55
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thestormcong: 金币+3, ★有帮助 2012-05-14 18:38:55
| 这个底物和酶的量是要不断摸索的。在你把反应体系加进去后测相应吸光值的变化，那时你要看你吸光值的变化，若反应过快，你则要调整酶和底物的量，此时你找到一个适合的量。测吸光值的变化时的时间间隔也是要自己摸索的，比如十秒测一个值，测十个值。然后你用时间间隔和相应的OD值做一条直线，此时的斜率就是你要的值。因为规定的是OD值每变化0.01为一个酶活单位,所以你此时的斜率还要乘以100，再除以你测的可溶性蛋白的量，就是你要的酶活了。单位是U/mg protein |
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3楼2012-05-13 23:52:08
sosako
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5楼2012-05-14 03:11:12