24小时热门版块排行榜    

查看: 4357  |  回复: 24
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

qizongxian

金虫 (小有名气)

[求助] 关于原生质体制备的问题

各位虫友,霉菌制备原生质体是加酶液,我配制了蜗牛酶的酶液,纤维素酶的酶液,还有溶壁酶,可是加进去之后效果不好只能够达到10^4的数量级,这个级数做原生质体融合不够啊~我想请问一下 我的问题出在哪里?
补充:酶液配制有一个星期了,保存是在四度冰箱里,酶解时间是四个小时,酶解温度是30℃~
还有,请问你们是怎么制备原生质体的?我怎么都做不出来~~听烦躁的!~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

AnaSequence

金虫 (小有名气)

换酶,多做点,浓缩
6楼2012-05-12 20:10:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 25 个回答

yc652090251

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
qizongxian: 金币+2, 有帮助, 感谢你回帖!~ 2012-05-12 00:16:38
zhang8826857: 金币+2, 欢迎常来微生物板块交流^_^ 2012-05-12 23:37:32
我前段时间也在做原生质体的制备,再生后跟你的差不多,后来我又看了几篇文献,发现每种菌的制备条件都不是一样的,这个条件得自己多多摸索,不知道你的条件是摸索过的还是怎么确定的,我打算过几天根据文献修改一下制备条件,比如培养基中甘氨酸的浓度,蔗糖含量,酶浓度及酶解时间等,最后挑选出再生后最好的条件。
   这是我的个人想法,我们可以互相交流一下!
低调做人好么~~
2楼2012-05-11 21:27:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qizongxian

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yc652090251 at 2012-05-11 21:27:38:
我前段时间也在做原生质体的制备,再生后跟你的差不多,后来我又看了几篇文献,发现每种菌的制备条件都不是一样的,这个条件得自己多多摸索,不知道你的条件是摸索过的还是怎么确定的,我打算过几天根据文献修改一 ...

不是,就是自己随即选定的,可是去年的时候能做出来。你说的那些我都知道,一般是做单因素优化,酶解时间,渗透压稳定剂,酶浓度还有就是菌龄等等条件,然后做一个正交什么的。能够问一下你制备的是神马原生质体吗?用到的是哪几种酶?
我知道不同公司的酶效果是不同的,不知道你用的是那个公司的酶啊?
3楼2012-05-12 00:16:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yc652090251

金虫 (小有名气)


rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-13 09:39:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by qizongxian at 2012-05-12 00:16:04:
不是,就是自己随即选定的,可是去年的时候能做出来。你说的那些我都知道,一般是做单因素优化,酶解时间,渗透压稳定剂,酶浓度还有就是菌龄等等条件,然后做一个正交什么的。能够问一下你制备的是神马原生质体 ...

我前段时间用的是国产的溶菌酶,具体哪个公司的我没问。条件也是根据文献选定的一些中等条件,做出来效果不好,而且我用这个酶提了一次基因组,一样效果不好!师兄他们说是酶的问题,后来实验室从国外进口过来一瓶新的 ,还没用呢,不知道效果怎么样,打算过几天再做一次,我做的是链霉菌。我觉得配好的酶溶液放冰箱应该没什么影响吧!
低调做人好么~~
4楼2012-05-12 12:34:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +8 ziyangfang 2026-08-25 11/550 2026-09-01 09:51 by zzuzxg
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见