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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, MolEPI+1, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-05-05 20:18:23
821078607: 金币+10, 谢谢你哈 2012-05-06 12:32:51
1 首先建议自己设计引物,文献上发表的引物并非绝对可信啊,尤其是EF低的文献。荧光定量的产物长度一般为100-200bp
2 没细查你的细胞是啥细胞,只要细胞系来自同一物种,理论上引物通用。只是扩增效率和反应条件有微小的不一样。
3 定量的前提是你的目的基因能用于定量,-ΔΔCt法应用的前提是目的基因和内参基因的扩增效率一样,所以为了验证你的公式是否适用于你的计算,肯定要做引物的扩增效率。做扩增效率当然要做标曲,因为你的实验应该是相对定量,所以不需要 标准品。
4我曾经打电话给生工,把他们骂了一顿,原因就是我询问他们是否可以提供引物设计服务但是他们没回复邮件。在我骂完他们之后,他们回复了邮件提供了他们帮我设计的引物,虽然是免费的,设计的质量水平一般,但是不能用,我那基因确实很难扩。在我印象里他们是不提供设计引物服务的。
2楼2012-05-05 18:42:54
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