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danyzj01

银虫 (正式写手)

[求助] 提基因组的时候做第一次PCR效果很好,但是直接以PCR产物做第二次PCR的模版后...

直接以PCR产物做第二次PCR的模版后,引物二聚体增加很多,也有目的条带出来,另外PCR体系的组分未变
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wuge415

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-03 13:59:30
通常,直接以上次pcr产物为模版,一般需稀释10-100倍,以避免过度的模版以及上次pcr中的引物及引物二聚体等等;条件许可,最好用回收试剂盒,有利于条件优化及后续实验
8楼2012-05-03 13:45:00
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你回收的PCR产物再做模板加的量是不是太多了?
未来不是梦
2楼2012-05-02 22:23:10
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danyzj01

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-05-02 22:23:10:
你回收的PCR产物再做模板加的量是不是太多了?

模版量多还是别的东西多?
是直接以PCR产物做模版,不是回收琼脂糖胶上的PCR产物
3楼2012-05-02 22:36:05
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vir2008

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR产物一般都要稀释的,太浓了反而不容易做好。
4楼2012-05-02 23:25:40
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