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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆质粒上的基因需要将质粒酶切成线性吗？
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查看: 2008  |  回复: 15
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imbest110

银虫 (小有名气)

[求助] 克隆质粒上的基因需要将质粒酶切成线性吗？

需要从购买的质粒上克隆出卡那霉素的抗性基因 不知道怎么进行  求助！谢谢好心人
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天道酬勤！
1楼 2012-05-02 15:20:18
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amilie030312

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
把需要的区域切下来扩增就好了啊
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2楼2012-05-02 15:52:01
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★
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西瓜: 回帖置顶 2012-05-02 16:26:20
西瓜: 金币+1, 正解！ 2012-05-02 16:26:45
直接以质粒当模板就行，不需要切开。
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Thank-you，so-blue.
3楼2012-05-02 16:19:08
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by amilie030312 at 2012-05-02 15:52:01:
把需要的区域切下来扩增就好了啊

这个真不需要酶切的……直接用质粒做模板进行PCR就好了。
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4楼2012-05-02 16:27:30
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summerjane

铁虫 (小有名气)

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★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-05-03 13:48:41
不需要将质粒切开，以质粒为模板，在卡那霉素抗性基因的上下游设计特异性物，用PCR扩增就可以了。
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5楼2012-05-02 20:44:50
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jqq1985

银虫 (正式写手)
不需要切开，直接PCR扩增就行了，就和从基因组上扩基因一样
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6楼2012-05-02 20:58:02
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快乐由自己go

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同意楼上各位观点，不需要酶切，直接用质粒做模板就OK
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7楼2012-05-03 02:45:59
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amilie030312

金虫 (正式写手)
哎，看来我已然Out了
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8楼2012-05-03 08:36:51
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sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

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感谢参与，应助指数 +1
确实不需要将质粒切开，直接PCR扩增就可以了。
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9楼2012-05-03 09:42:56
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vinie

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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西瓜: 金币+2, 鼓励交流！ 2012-05-03 17:57:56
西瓜: 回帖置顶 2012-05-03 17:58:02
如果是所需的基因两边有酶切位点，当然酶切是最好了，如果没有只能PCR扩增，但后面要测序
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10楼2012-05-03 09:50:40
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