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saliangqh

新虫 (正式写手)

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[交流] DNA电泳

跑DNA电泳的亲们交流一下DNA电泳吧谢谢了

这是我跑的电泳
用CTAB法提取
将样品加20μl SDS和1ml预热的CTAB提取液，在65℃下水浴1h，其每间隔5min轻轻摇晃，加入等体积的苯酚：氯仿：异戊醇=25:24:1，在漩涡混合器上震荡混匀，10000r4℃离心10min，取上清加1ml冷冻的无水乙醇和50μl乙酸钠（3M PH=5）-20℃冷冻1h，10000r4℃离心10min，用70%无水乙醇洗涤2次，干燥后加TE溶解，-20℃保存备用。
0.8%琼脂糖电泳染色10min 凝胶成像
出来的图像是这样的想请大家帮分析一下谢谢

[ Last edited by saliangqh on 2012-5-2 at 17:11 ]

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1楼2012-05-01 21:07:56

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xiaoxiong520

银虫 (初入文坛)

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★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+4, 鼓励交流 2012-05-09 18:52:31

（1）  操作上：磨样后加入裂解液可以用漩涡混合器上震荡混匀，之后抽提过程中不可剧烈震荡，否则DNA容易断裂；
（2）电泳结果：
   点样孔很亮的，说明提取的DNA含蛋白质等杂质；
   靠近点样孔附近的稍亮的带是DNA，下部较亮的是RNA，且降解厉害，建议提完DNA后，用1%的RNase于37℃消化RNA 2h；
   检测DNA时，注意琼脂糖凝胶厚度不要超过0.5cm，否则影响成像效果，电压要稳，缓冲液尽量用新配的；