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双酶切看不到小片段,为什么?
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fannyzehong
银虫
(初入文坛)
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虫号: 1284449
注册: 2011-05-03
专业: 植物遗传学
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求助
]
双酶切看不到小片段,为什么?
质粒双酶切看不到小片段,是怎么回事?是双酶切失败了吗?请各位大侠帮忙分析分析,谢谢!
泳道1:质粒;2:BamHI单酶切;3:NcoI单酶切;4:BamHI,NcoI双酶切
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请问哪里可以有青B申请的本子可以借鉴一下。
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1楼
2012-04-27 17:29:12
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huguangdong
至尊木虫
(职业作家)
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帖子: 4271
在线: 1581.2小时
虫号: 1009663
注册: 2010-05-01
专业: 畜牧学
你的目的片段多大?看你这个图双酶切比但酶切的载体片段要小,那么目的片段应该是切下来了,看不到没关系,可能和你目的片段过小,EB染色不完全有关系。
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13楼
2012-04-28 20:20:31
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cxfans
铁杆木虫
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虫号: 1058717
注册: 2010-07-16
性别: GG
专业: 植物病理学
【答案】应助回帖
感谢参与,应助指数 +1
我觉得是不是你用的酶切缓冲液不是两者兼容的 建议试一下连续单酶切试试,只是有点耗时
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2楼
2012-04-27 21:40:21
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第五平原
木虫
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性别: GG
专业: 蔬菜学与瓜果学
【答案】应助回帖
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感谢参与,应助指数 +1
fannyzehong: 金币+1
2012-04-28 17:13:36
yqbter: 金币+1, 鼓励发帖交流!
2012-06-03 10:18:35
我自己在实验中也遇到过这种情况,双酶切后只能看到载体片段而看不见目标基因片段,据师兄说是因为如果载体的分子量是目标基因分子量的几百倍,同样拷贝数的情况下载体与基因的亮度也呈相应的比例,也就是说载体会远远亮于基因,不知道你具体试验中是什么情况,希望这个回答对你有所帮助
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勤勉
3楼
2012-04-27 22:33:07
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淘气维尼89
木虫
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注册: 2012-04-18
性别: GG
专业: 抗体工程学
【答案】应助回帖
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从图示来看,应该是切了一部分吧,毕竟模板质粒跑的最慢。但是你的三种酶怎么跑出的条带都在一条线上,是不是酶的活力不够,或是切出来的片段被破坏了,显示不出来?双酶切的Buffer估计不一样吧?
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4楼
2012-04-27 23:39:21
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