| 查看: 4467 | 回复: 12 | |||||
| 本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
dfhfzyl铁虫 (小有名气)
|
[求助]
大片段PCR(2.1K)扩增求助
|
||||
|
我要扩增一个片段为2100bp的cDNA 我的目的基因是来自柑橘的基因,柑橘基因组已经发布了. 设计引物时,直接选基因cds全长的头尾14-22bp, 正反引物的GC比例尽量保持一致了. 我的扩增条件是: 模板2ul (模板浓度约为500ng) 正反引物为0.2ul buffer 2ul dNTP 2ul Mgcl2 1.2ul Taq酶 0.2 (我师兄建议我在真正扩增时需选择高保真酶如pfu) ddH2O2调到20ul体系 PCR条件 94度4min 94度30秒 55度30秒 72度2:10分 30个循环 72度10分 4度半小时 按照以上的程序,我对6个目的基因(大小在都在2kB左右)扩增了好几次都没有明显的带出来或者带很弱,而有一个基因出现了三条非常弱的带? 求助高手!!! |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 核酸生物学实验经验 | 【分子生物】EPI帖 | 代谢毒理细胞生物 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有60人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助：PCR扩增片段测序结果引物中间多出150bp的片段
已经有5人回复
- 大片段PCR扩增求助
已经有34人回复
- 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
已经有15人回复
- 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
已经有30人回复
- 真菌ITS序列PCR扩增 求助
已经有9人回复
- 求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？
已经有24人回复
- 【求助/交流】土壤DNA提取及PCR
已经有20人回复
- 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】为什么PCR扩增产物片段长度比设计时的要长很多？
已经有10人回复
- 【求助/交流】请教PCR条件优化
已经有9人回复
- 【求助/交流】PCR扩增后没有条带是怎么回事?
已经有5人回复
- 【求助/交流】大片段连接转化成功与否问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】重组质粒PCR的taq酶选择！
已经有11人回复
whj3344
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1205.1
- 散金: 20
- 帖子: 147
- 在线: 86.4小时
- 虫号: 826610
- 注册: 2009-08-12
- 专业: 消化系统肿瘤
7楼2012-05-01 15:19:18
2楼2012-04-25 13:20:37
3楼2012-04-26 17:22:10
ixido
木虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 33 (小学生)
- 金币: 2066.4
- 红花: 6
- 帖子: 206
- 在线: 70.4小时
- 虫号: 998373
- 注册: 2010-04-16
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2012-04-26 18:27:19
20