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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助啊求助，关于trypan blue台盼蓝染色的问题！！！
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sean-u

金虫 (小有名气)

[求助] 求助啊求助，关于trypan blue台盼蓝染色的问题！！！

向各位高人求助，我是植物类病变的trypan blue台盼蓝染色，用的是台盼蓝-乳酚溶液，配方是2.5mg/ml的台盼蓝（sigma），25％乳酸，23％水饱和酚，25％的甘油和水。我试了好几种方法，首先是叶片放入染料中在沸水浴中加热10-20分钟，然后观察发现有病斑的地方还是深黄色其外围的一圈白色也没有被染上；第二种方法是直接在染料里煮10-15分钟，发现还是与上一种方法差不多的结果；第三种方法就是直接浸在染料中光照，结果叶片蜷曲。请问用什么方法才能做出来呀，疯了我，做了一个星期了！！！
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人生就是不停的战斗！
1楼2012-04-23 21:05:27
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feichen2008

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
染色液配方：10 ml 85%乳酸，10 ml水饱和酚，10 ml甘油，10 ml纯水，15 mg trypan blue染料。
方法：取1 cm × 1 cm大小的烟草切片或拟南芥整张叶片放入24孔组培板中；加入trypan blue染液，真空抽滤使染液进入细胞间隙；沸水煮沸5-8 min；室温下静置染色6-8 h；用2.5 g/ml的水合氯醛溶液脱色，直到组织完全透明为止；脱色好的叶片在Olympus显微镜下观察，拍照，并统计死细胞数目。
希望能对楼主有所帮助。
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5楼2012-04-26 14:58:35
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lihui_2004

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你参考下这篇文献上的：Chemical-induced resistance against powdery mildew in barley: the effects of chitosan and benzothiadiazole,不知道对你是否有用。台盼蓝的浓度不一样，还有用的苯酚不是饱和酚，还有你煮的时间好长啊，可能因为植物材料不同！
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Dream what you want to dream, go where you want to go, be what you want to be.
2楼2012-04-24 11:20:18
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sean-u

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lihui_2004 at 2012-04-24 11:20:18:
你参考下这篇文献上的：Chemical-induced resistance against powdery mildew in barley: the effects of chitosan and benzothiadiazole,不知道对你是否有用。台盼蓝的浓度不一样，还有用的苯酚不是饱和酚，还有 ...

谢谢，我先试试看，我上面的配方也是参考了很多文献才用的。煮的时间长是因为时间短的话观察还是不易着色。
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人生就是不停的战斗！
3楼2012-04-24 15:54:49
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花斑凳子

银虫 (初入文坛)
telomerase: , 私下交流去吧。。。。。。。。。。。 2012-04-25 10:44:46
我知道，联系我啦，呵呵
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4楼2012-04-24 21:49:31
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