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xueshu110

禁虫 (正式写手)

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kzdylr6

铁虫 (小有名气)

★ ★
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zhaohq1209: 金币+1, 鼓励交流。要是能说的更详细一点就好了 2012-04-23 23:09:17
不用加裂解液,直接加DMSO就是了
2楼2012-04-23 19:14:51
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jessica-wang

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
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zhaohq1209: 金币+2, 鼓励交流 2012-04-23 23:09:02
不知道你是什么细胞,在加DMSO前,弃上清弃去了多少?
不过不管你弃多少,也不可能弃的很完全。对照组的意义,就在于调零,除去培养基及DMSO等对甲月赞吸光值的影响~
3楼2012-04-23 21:01:16
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sl35537417

木虫 (正式写手)


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control 一开始 什么都不加  最后只加DMSO  上机
我在米国这个实验室都是这么做的
4楼2012-04-24 04:40:25
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chimindu

捐助贵宾 (正式写手)

荧光DuBoss



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我用北京泛博生物化学公司的CCK试剂盒代替MTT,就没加DMSO,直接测。
5楼2012-04-24 09:09:52
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pingan88

新虫 (小有名气)


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我觉得需要加,因为吸取培养液的过程中会有残留的,会影响OD值,我也试验过了,会有小的影响。
6楼2012-04-24 10:07:05
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崔宁

新虫 (小有名气)


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首先,加DMSO前要不要吸出一部分我个人觉得都可以,往往大家吸出来是因为96孔板的1个孔最多只能容纳200ul左右溶液,可你加DMSO还是要加过量的(将全部甲赞沉淀都溶解),一般150ul。所以吸出上部溶液。总之,只要把对照做好就好。还有溶解甲赞除了用DMSO,还可以用酸性SDS,不是裂解液。
7楼2012-04-24 16:24:27
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mamadexiao

木虫 (正式写手)


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我是这么做MTT的
1.空白(只加培养基)
2.正常对照(不加药的)
3处理组(加药)
处理时间之后,每孔直接加MTT(96孔,10ul)
2-4小时,弃去全部的培养基(这个时候,细胞全死了,剩下的就是细胞和MTT反应后的甲“瓒”结晶)
然后加DMSO,震荡10min,492读数
8楼2012-04-24 20:49:27
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9楼2012-04-24 21:13:31
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yanglinlynn

金虫 (小有名气)


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培养基加入孔板中,即使后来被弃去,还是会有一部分附着在孔底的,所以还是会对OD值有影响的。不用加裂解液,只用DMSO就可以了
10楼2012-04-24 23:07:06
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