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[求助]
求助关于土壤细菌分离鉴定的知识，希望朋友帮忙解答
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| 我要从土壤中分离和鉴定出未知的菌（细菌或真菌均存在），求助怎样设计实验方案，怎样的一个实验思路也行。 |
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xinongfish
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
renlu0521: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢！ 2012-04-17 22:11:50
renlu0521: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2012-04-18 22:35:35
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1.你是否是从土壤中筛选新菌种？如果是筛选新菌种的话，那这个还是有一定难度的，要用特殊的培养基进行针对性的筛选，比如筛哪类菌找对应的培养基，当然有的培养基是秘方了，如果你实验室有做过的就直接用现成的方法即可。 2.如果你是做土壤可培养微生物分析的话，那么你考虑你的样点是否有特殊性，比如低温，高温，高盐等情况，也是针对性的选用几种培养基进行筛选。如果是普通的土壤，那么用几种常用的培养基比如牛肉膏蛋白胨for细菌，高氏一号for放线菌，孟加拉红培养基for真菌等进行筛选。 3.针对你后来提的问题，培养基上至少有两种菌，你最好还是划线分离纯化一下，镜检是否是单菌再进行PCR鉴定，当然一般划线分离1-2次挑取单菌落也可以。分离纯化的方法就是划线分离了（这个百度一下就知道了），鉴定就看你是什么菌了，细菌的话用16S通用引物（27f，1492r），真菌的话用18S通用引物（ITS1，ITS4）扩增后送测。 不知道我是否说清楚了，相互交流  |
3楼2012-04-17 20:54:32
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您好~非常感谢帮忙，但是还是有几个不大明白的地方（根据您提出的三个方面） 1.目前是有两种土壤样品。不知道其中可能含有那种菌种，但目前可以确定的是一定有病原菌。由于我们实验室不是研究这方面的，现在有点茫然。目前也只用了PDA培养基和牛肉膏蛋白胨培养基进行初步筛选。。。也不知道对不对 主要的目的就是讲土壤样品中主要的病原菌进行分离，并鉴定出所属种属。 2.如上所说，土壤是病害土壤，目前只用了以上两种培养基（另外PDA培养基中加入了硫酸链霉素抑制细菌和放线菌生长，我也知道并不能抑制所有细菌。。但是目前师兄给的实验思路是这样的就照做了） 3.目前还只进行了第一次的划线培养。。。主要是考虑多种菌的问题。。所以不大明白需要划线培养到怎样的程度进行PCR检测 以上，非常感谢您的帮忙~~结束后会补上金币，谢谢您~~ |
4楼2012-04-17 22:11:01
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