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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 求助关于土壤细菌分离鉴定的知识，希望朋友帮忙解答
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renlu0521

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助关于土壤细菌分离鉴定的知识，希望朋友帮忙解答

我要从土壤中分离和鉴定出未知的菌（细菌或真菌均存在），求助怎样设计实验方案，怎样的一个实验思路也行。
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1楼 2012-04-17 20:08:43
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WSW_Alone

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
renlu0521: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢！ 2012-04-17 22:11:50
renlu0521: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2012-04-18 22:35:35
1.你是否是从土壤中筛选新菌种？如果是筛选新菌种的话，那这个还是有一定难度的，要用特殊的培养基进行针对性的筛选，比如筛哪类菌找对应的培养基，当然有的培养基是秘方了，如果你实验室有做过的就直接用现成的方法即可。
2.如果你是做土壤可培养微生物分析的话，那么你考虑你的样点是否有特殊性，比如低温，高温，高盐等情况，也是针对性的选用几种培养基进行筛选。如果是普通的土壤，那么用几种常用的培养基比如牛肉膏蛋白胨for细菌，高氏一号for放线菌，孟加拉红培养基for真菌等进行筛选。
3.针对你后来提的问题，培养基上至少有两种菌，你最好还是划线分离纯化一下，镜检是否是单菌再进行PCR鉴定，当然一般划线分离1-2次挑取单菌落也可以。分离纯化的方法就是划线分离了（这个百度一下就知道了），鉴定就看你是什么菌了，细菌的话用16S通用引物（27f，1492r），真菌的话用18S通用引物（ITS1，ITS4）扩增后送测。
不知道我是否说清楚了，相互交流
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處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
3楼2012-04-17 20:54:32
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renlu0521

新虫 (初入文坛)
还有想请问一下，目前培养基上划线生长的至少有两种细菌，可以不分离直接做PCR鉴定吗？或者具体要怎样分离纯化进行鉴定呢？
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2楼2012-04-17 20:43:46
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renlu0521

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by WSW_Alone at 2012-04-17 20:54:32:
1.你是否是从土壤中筛选新菌种？如果是筛选新菌种的话，那这个还是有一定难度的，要用特殊的培养基进行针对性的筛选，比如筛哪类菌找对应的培养基，当然有的培养基是秘方了，如果你实验室有做过的就直接用现成的方 ...

您好~非常感谢帮忙，但是还是有几个不大明白的地方（根据您提出的三个方面）
1.目前是有两种土壤样品。不知道其中可能含有那种菌种，但目前可以确定的是一定有病原菌。由于我们实验室不是研究这方面的，现在有点茫然。目前也只用了PDA培养基和牛肉膏蛋白胨培养基进行初步筛选。。。也不知道对不对
主要的目的就是讲土壤样品中主要的病原菌进行分离，并鉴定出所属种属。
2.如上所说，土壤是病害土壤，目前只用了以上两种培养基（另外PDA培养基中加入了硫酸链霉素抑制细菌和放线菌生长，我也知道并不能抑制所有细菌。。但是目前师兄给的实验思路是这样的就照做了）
3.目前还只进行了第一次的划线培养。。。主要是考虑多种菌的问题。。所以不大明白需要划线培养到怎样的程度进行PCR检测

以上，非常感谢您的帮忙~~结束后会补上金币，谢谢您~~
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4楼2012-04-17 22:11:01
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WSW_Alone

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by renlu0521 at 2012-04-17 22:11:01:
您好~非常感谢帮忙，但是还是有几个不大明白的地方（根据您提出的三个方面）
1.目前是有两种土壤样品。不知道其中可能含有那种菌种，但目前可以确定的是一定有病原菌。由于我们实验室不是研究这方面的，现在有点 ...

1，你们要筛选病原菌的话，知道大概是什么菌吗？有没有相关的文献资料筛选过，他们用的什么培养基？你们用PDA（真菌）和牛肉膏蛋白胨（细菌）初筛应该可以，鉴定就我之前说的方法了。
2，PDA加抗生素是可以的，如果你们条件允许，直接买孟加拉红培养基（配好了的成品，也添加了抗生素的）直接用，方便一些。
3，一开始涂布之后，挑取单菌进行划线，然后再挑取单菌落进行划线，一般划2次就行了。不知道你说的“主要是考虑多种菌的问题”是啥意思，如果你划线之后还有多种菌的话，你就得再分别挑到新的培养基上进行划线分离，直至得到单一菌了。
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處世樹為模，本固任從枝葉動；立身錢作樣，內方還要外邊圓。
5楼2012-04-18 09:59:24
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