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renlu0521

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助关于土壤细菌分离鉴定的知识,希望朋友帮忙解答

我要从土壤中分离和鉴定出未知的菌(细菌或真菌均存在),求助怎样设计实验方案,怎样的一个实验思路也行。
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WSW_Alone

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
renlu0521: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢! 2012-04-17 22:11:50
renlu0521: 金币+4, ★★★★★最佳答案 2012-04-18 22:35:35
1.你是否是从土壤中筛选新菌种?如果是筛选新菌种的话,那这个还是有一定难度的,要用特殊的培养基进行针对性的筛选,比如筛哪类菌找对应的培养基,当然有的培养基是秘方了,如果你实验室有做过的就直接用现成的方法即可。
2.如果你是做土壤可培养微生物分析的话,那么你考虑你的样点是否有特殊性,比如低温,高温,高盐等情况,也是针对性的选用几种培养基进行筛选。如果是普通的土壤,那么用几种常用的培养基比如牛肉膏蛋白胨for细菌,高氏一号for放线菌,孟加拉红培养基for真菌等进行筛选。
3.针对你后来提的问题,培养基上至少有两种菌,你最好还是划线分离纯化一下,镜检是否是单菌再进行PCR鉴定,当然一般划线分离1-2次挑取单菌落也可以。分离纯化的方法就是划线分离了(这个百度一下就知道了),鉴定就看你是什么菌了,细菌的话用16S通用引物(27f,1492r),真菌的话用18S通用引物(ITS1,ITS4)扩增后送测。
不知道我是否说清楚了,相互交流
處世樹為模,本固任從枝葉動;立身錢作樣,內方還要外邊圓。
3楼2012-04-17 20:54:32
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renlu0521

新虫 (初入文坛)

还有想请问一下,目前培养基上划线生长的至少有两种细菌,可以不分离直接做PCR鉴定吗?或者具体要怎样分离纯化进行鉴定呢?
2楼2012-04-17 20:43:46
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renlu0521

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by WSW_Alone at 2012-04-17 20:54:32:
1.你是否是从土壤中筛选新菌种?如果是筛选新菌种的话,那这个还是有一定难度的,要用特殊的培养基进行针对性的筛选,比如筛哪类菌找对应的培养基,当然有的培养基是秘方了,如果你实验室有做过的就直接用现成的方 ...

您好~非常感谢帮忙,但是还是有几个不大明白的地方(根据您提出的三个方面)
1.目前是有两种土壤样品。不知道其中可能含有那种菌种,但目前可以确定的是一定有病原菌。由于我们实验室不是研究这方面的,现在有点茫然。目前也只用了PDA培养基和牛肉膏蛋白胨培养基进行初步筛选。。。也不知道对不对
主要的目的就是讲土壤样品中主要的病原菌进行分离,并鉴定出所属种属。
2.如上所说,土壤是病害土壤,目前只用了以上两种培养基(另外PDA培养基中加入了硫酸链霉素抑制细菌和放线菌生长,我也知道并不能抑制所有细菌。。但是目前师兄给的实验思路是这样的就照做了)
3.目前还只进行了第一次的划线培养。。。主要是考虑多种菌的问题。。所以不大明白需要划线培养到怎样的程度进行PCR检测

以上,非常感谢您的帮忙~~结束后会补上金币,谢谢您~~
4楼2012-04-17 22:11:01
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WSW_Alone

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by renlu0521 at 2012-04-17 22:11:01:
您好~非常感谢帮忙,但是还是有几个不大明白的地方(根据您提出的三个方面)
1.目前是有两种土壤样品。不知道其中可能含有那种菌种,但目前可以确定的是一定有病原菌。由于我们实验室不是研究这方面的,现在有点 ...

1,你们要筛选病原菌的话,知道大概是什么菌吗?有没有相关的文献资料筛选过,他们用的什么培养基?你们用PDA(真菌)和牛肉膏蛋白胨(细菌)初筛应该可以,鉴定就我之前说的方法了。
2,PDA加抗生素是可以的,如果你们条件允许,直接买孟加拉红培养基(配好了的成品,也添加了抗生素的)直接用,方便一些。
3,一开始涂布之后,挑取单菌进行划线,然后再挑取单菌落进行划线,一般划2次就行了。不知道你说的“主要是考虑多种菌的问题”是啥意思,如果你划线之后还有多种菌的话,你就得再分别挑到新的培养基上进行划线分离,直至得到单一菌了。
處世樹為模,本固任從枝葉動;立身錢作樣,內方還要外邊圓。
5楼2012-04-18 09:59:24
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