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shirleylauNV

新虫 (初入文坛)

[交流] 利用基因枪遗传转化法导入基因片段

我想利用基因枪法转入片段基因到植物中，以前做过基因枪打入质粒，现在想做基因片段，请问有朋友做过吗，请交流下，最好有相关文献。谢谢！
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1楼 2012-04-17 13:46:45
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们实验室主要是把目的基因的表达盒酶切纯化加上筛选标记的片段打的基因枪结果还可以1%阳性苗。
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2楼2012-04-17 15:07:13
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shirleylauNV

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-17 15:07:13:
我们实验室主要是把目的基因的表达盒酶切纯化加上筛选标记的片段打的基因枪结果还可以1%阳性苗。

请问你有相关文献和资料吗，我没找到相关片段打基因枪的资料。谢谢。
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3楼2012-04-18 15:10:34
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
打片段跟质粒步骤一样只是打片段需要酶切纯化，文献我这没有。
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4楼2012-04-18 16:33:43
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shirleylauNV

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-18 16:33:43:
打片段跟质粒步骤一样只是打片段需要酶切纯化，文献我这没有。

请教下，我是新手。
1、我理解打片段基因，是启动子+目的基因+终止子+启动子+筛选基因+终止子。是这样的片段吗？去掉一些抗生素的筛选基因。
2、酶切纯化，就是我从质粒上把我需要的片段，利用酶切位点，切下来，然后纯化后，打枪。浓度和打质粒时浓度一样吗？
3、请问您做的什么材料啊，阳性率能到1%。
谢谢！
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5楼2012-04-18 19:39:47
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
shirleylauNV: 金币+2, 太谢谢了，有问题我再请教。 2012-04-19 12:46:47
转化小麦幼胚，浓度是1ug/ul，8-20ul。启动子+目的基因+终止子+启动子+筛选基因+终止子可以连一块，也可以是两个片段混合打。
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6楼2012-04-18 21:40:46
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