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wangzhiwei6858

金虫 (小有名气)

[求助] 50金币求50mM磷酸缓冲液配方

准备要做绿藻细胞的酶活,查了很多文献,用的都是50mM磷酸盐缓冲液,pH为7.0和7.8。但是都没说配方,在此求助。
测酶活是不是要加NaCl和KCl,加多少?
请给出配方出处,急求,多谢。
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Crescendo

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangzhiwei6858: 金币+10, ★有帮助, 感谢帮助 2012-04-17 10:31:22
wangzhiwei6858: 金币+5, ★有帮助 2012-04-17 10:33:25
PBS 是最普遍不过的实验室缓冲液,但其配方各异。以下是我的总结:
母液的配制:
0.2M Na2HPO4:称取71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于1000ml 水
0.2M NaH2PO4:称取31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于1000ml 水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制:
先配 0.2M PB (pH=7.4,100ml):取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4,
81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。
然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可,如:
0.1M PB(PH=7.4) :取500ml 0.2M PB,加水稀释至1000ml 即可。
0.01M PB (PH=7.4):取50ml 0.2M PB,加水稀释至1000ml 即可。
0.02M PB (PH=7.4):取100ml 0.2 M PB,加水稀释至1000ml 即可。
若需要NaCL 的话,加入NaCL 至0.9%(g/100ml)即可。
另:其它各种PH 值的0.2M PB(100ml)配方:
pH 0.2M NaH2PO4(ml) 0.2M Na2HPO4(ml)
5.7 93.5 6.5
5.8 92 8
5.9 90 10
6.0 87.7 12.3
6.1 85 15
6.2 81.5 18.5
6.3 77.5 22.5
6.4 73.5 26.5
6.5 68.5 31.5
6.6 62.5 37.5
6.7 56.5 43.5
6.8 51 49
6.9 45 55
7.0 38 62
7.1 33 67
7.2 28 72
7.3 23 77
7.4 19ml 81ml
7.5 16 84
7.6 13 87
7.7 10.5 90.5
7.8 8.5 91.5
7.9 7 93
8.0 5.3 94.7
日拱一卒,功不唐捐
7楼2012-04-16 18:39:35
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普通回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wangzhiwei6858: 金币+10, ★有帮助 2012-04-17 10:30:37
wangzhiwei6858: 金币+10, ★有帮助 2012-04-17 10:32:44
你可以先配成1M PB,然后稀释成50mm就可以了,或者你直接配成50mm PB 调节pH就可以了!
I am not a hero , but I served with heroes!
2楼2012-04-16 15:46:46
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wangzhiwei6858

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wlt728 at 2012-04-16 15:46:46:
你可以先配成1M PB,然后稀释成50mm就可以了,或者你直接配成50mm PB 调节pH就可以了!

你说的就是不加氯化钠和氯化钾了?测酶活不用吗?
3楼2012-04-16 15:51:29
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wangzhiwei6858

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wlt728 at 2012-04-16 15:46:46:
你可以先配成1M PB,然后稀释成50mm就可以了,或者你直接配成50mm PB 调节pH就可以了!

你说的就是不加氯化钠和氯化钾了?测酶活不用吗?
4楼2012-04-16 15:51:36
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

我做的是蛋白纯化,测酶活加不加就不知道了,个人觉得不加也可以的!
I am not a hero , but I served with heroes!
5楼2012-04-16 15:57:44
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wangzhiwei6858

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wlt728 at 2012-04-16 15:57:44:
我做的是蛋白纯化,测酶活加不加就不知道了,个人觉得不加也可以的!

其实我觉得应该有固定的配方的。文献中那么多人用,怎么没人回答呢?
对于先配A,B两种50mM磷酸缓冲母液,然后在用pH计一边测一边加A,B母液是可以达到目标的,可是就不知道氯化钠和氯化钾的用量了?
郁闷
6楼2012-04-16 16:29:27
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yiqianying

金虫 (著名写手)

我毕业设计也做一部分螺旋藻里酶活测定~有事可以请教你吗?
↖(^ω^)↗···
8楼2012-04-16 19:05:22
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

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wangzhiwei6858: 金币+10, ★有帮助, 感谢帮助 2012-04-17 10:31:48
wangzhiwei6858: 金币+5, ★有帮助 2012-04-17 10:33:32
冷泉港的分子克隆手册附录里有配方
9楼2012-04-17 00:03:35
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wangzhiwei6858

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yiqianying at 2012-04-16 19:05:22:
我毕业设计也做一部分螺旋藻里酶活测定~有事可以请教你吗?

请教谈不上,我也刚做,相互帮忙吧。
10楼2012-04-17 07:59:41
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