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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 50金币求50mM磷酸缓冲液配方
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wangzhiwei6858

金虫 (小有名气)

[求助] 50金币求50mM磷酸缓冲液配方

准备要做绿藻细胞的酶活，查了很多文献，用的都是50mM磷酸盐缓冲液，pH为7.0和7.8。但是都没说配方，在此求助。
测酶活是不是要加NaCl和KCl，加多少？
请给出配方出处，急求，多谢。
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1楼 2012-04-16 15:33:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Crescendo

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangzhiwei6858: 金币+10, ★有帮助, 感谢帮助 2012-04-17 10:31:22
wangzhiwei6858: 金币+5, ★有帮助 2012-04-17 10:33:25
PBS 是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。以下是我的总结：
母液的配制：
0.2M Na2HPO4：称取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于1000ml 水
0.2M NaH2PO4：称取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制：
先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4，
81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。
然后 只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：
0.1M PB（PH=7.4） ：取500ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。
0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至1000ml 即可。
0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至1000ml 即可。
若需要NaCL 的话，加入NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。
另：其它各种PH 值的0.2M PB（100ml）配方：
pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）
5.7 93.5 6.5
5.8 92 8
5.9 90 10
6.0 87.7 12.3
6.1 85 15
6.2 81.5 18.5
6.3 77.5 22.5
6.4 73.5 26.5
6.5 68.5 31.5
6.6 62.5 37.5
6.7 56.5 43.5
6.8 51 49
6.9 45 55
7.0 38 62
7.1 33 67
7.2 28 72
7.3 23 77
7.4 19ml 81ml
7.5 16 84
7.6 13 87
7.7 10.5 90.5
7.8 8.5 91.5
7.9 7 93
8.0 5.3 94.7
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日拱一卒，功不唐捐
7楼2012-04-16 18:39:35
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普通回帖

wlt728

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangzhiwei6858: 金币+10, ★有帮助 2012-04-17 10:30:37
wangzhiwei6858: 金币+10, ★有帮助 2012-04-17 10:32:44
你可以先配成1M PB，然后稀释成50mm就可以了，或者你直接配成50mm PB 调节pH就可以了！
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I am not a hero , but I served with heroes！
2楼2012-04-16 15:46:46
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wangzhiwei6858

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wlt728 at 2012-04-16 15:46:46:
你可以先配成1M PB，然后稀释成50mm就可以了，或者你直接配成50mm PB 调节pH就可以了！

你说的就是不加氯化钠和氯化钾了？测酶活不用吗？
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3楼2012-04-16 15:51:29
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wangzhiwei6858

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wlt728 at 2012-04-16 15:46:46:
你可以先配成1M PB，然后稀释成50mm就可以了，或者你直接配成50mm PB 调节pH就可以了！

你说的就是不加氯化钠和氯化钾了？测酶活不用吗？
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4楼2012-04-16 15:51:36
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wlt728

铁杆木虫 (著名写手)
我做的是蛋白纯化，测酶活加不加就不知道了，个人觉得不加也可以的!
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I am not a hero , but I served with heroes！
5楼2012-04-16 15:57:44
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wangzhiwei6858

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wlt728 at 2012-04-16 15:57:44:
我做的是蛋白纯化，测酶活加不加就不知道了，个人觉得不加也可以的!

其实我觉得应该有固定的配方的。文献中那么多人用，怎么没人回答呢？
对于先配A,B两种50mM磷酸缓冲母液，然后在用pH计一边测一边加A,B母液是可以达到目标的，可是就不知道氯化钠和氯化钾的用量了？
郁闷
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6楼2012-04-16 16:29:27
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yiqianying

金虫 (著名写手)
我毕业设计也做一部分螺旋藻里酶活测定~有事可以请教你吗？
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↖(^ω^)↗···
8楼2012-04-16 19:05:22
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alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangzhiwei6858: 金币+10, ★有帮助, 感谢帮助 2012-04-17 10:31:48
wangzhiwei6858: 金币+5, ★有帮助 2012-04-17 10:33:32
冷泉港的分子克隆手册附录里有配方
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9楼2012-04-17 00:03:35
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wangzhiwei6858

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by yiqianying at 2012-04-16 19:05:22:
我毕业设计也做一部分螺旋藻里酶活测定~有事可以请教你吗？

请教谈不上，我也刚做，相互帮忙吧。
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10楼2012-04-17 07:59:41
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