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ding_winnie

无虫 (小有名气)

[求助] 镍柱 纯化

新人求助:镍柱纯化的具体方法,越详细越好!还有如何用凝血酶切除标签?
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jinbangming

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by jinbangming at 2012-04-17 15:44:45:
请查收邮件

不好意思,邮箱写错了,请查收
11楼2012-04-18 11:50:34
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
总体上分三步,结合,漂洗和洗脱,主要是利用不同浓度的咪唑进行上述步骤的,具体的参数记不住了,但是买主材料时有一个小册子,里面有详细的说明书
3楼2012-04-15 08:08:12
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ghs25372216

禁虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
ding_winnie: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-04-16 15:49:41
西瓜: 金币+1, 欢迎常来! 2012-04-16 21:12:37
本帖内容被屏蔽

4楼2012-04-15 09:35:28
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to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-16 13:59:29
ding_winnie: 回帖置顶 2012-04-16 15:49:46
ding_winnie: 金币+6, ★★★很有帮助 2012-04-16 15:50:15
1.将柱子挂好镍,最好用buffer或者低浓度咪唑洗下柱子,低温待用。
2.将诱导好的菌体溶在合适buffer(pH,盐浓度和种类需要摸索)中重悬,超声破碎菌体,高速离心,取上清过柱子。流速低于2mL/min即可。
3.用不同浓度的咪唑进行分级梯度洗脱蛋白,会将杂质和目标蛋白分离开,梯度需要摸索。
4.将获得的样品分别取样SDS-PAGE检测,包括诱导的菌,沉淀上清都电泳检测。
生活是面镜子~
5楼2012-04-15 13:26:17
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