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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助】请教cDNA-AFLP 实验的相关问题，请大家帮忙看看，谢谢
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hc1027

木虫 (正式写手)

[求助] 【求助】请教cDNA-AFLP 实验的相关问题，请大家帮忙看看，谢谢

打算做cDNA-AFLP 差异表达，想请教几个问题：
1、选择性扩增的时候用33P标记的引物是为何呢？ 这个标记的引物贵吗，价格如何？
2、内切酶一般买什么公司的比较好呢？我做真菌的，不知道用哪种内切酶比较好？
3、因为是第一次做，身边没人做过，请问如何判断每步的效果呢？以及每步的注意事项有什么？
①cDNA的准备
②酶切
③连接
④预扩增
⑤选择性扩增
⑥电泳及切胶。

希望有经验的人帮忙指点，不甚感激。

[ Last edited by hc1027 on 2012-4-14 at 15:47 ]
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1楼 2012-04-14 15:46:01
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hc1027

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 霸_霸 at 2012-04-25 10:47:38:
我也是真菌差异性表达的，常用的内切酶是Hae 3，Hha 1，Hif 1这三个比较好区分度较大，你也可以尝试下。

谢谢，请问能否提供几篇关于真菌差异性研究的文献呢？最好是用到了内切酶的外文文献。权威的当然更好。
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9楼2012-04-25 16:43:49
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hc1027

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by foxmygod at 2012-04-22 02:28:04:
建议用NEB的酶

fermentas的可以不

neb的很贵吧
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5楼2012-04-22 09:16:43
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foxmygod

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by hc1027 at 2012-04-22 09:16:43:
fermentas的可以不

neb的很贵吧

你的用量很大么？
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6楼2012-04-24 22:00:10
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hc1027

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by foxmygod at 2012-04-24 22:00:10:
你的用量很大么？

应该不会太大吧  样品不是很多。
满足cdna-aflp需要即可
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7楼2012-04-24 22:39:27
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