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hc1027

木虫 (正式写手)

[求助] 【求助】请教cDNA-AFLP 实验的相关问题,请大家帮忙看看,谢谢

打算做cDNA-AFLP 差异表达,想请教几个问题:
1、选择性扩增的时候用33P标记的引物是为何呢? 这个标记的引物贵吗,价格如何?
2、内切酶一般买什么公司的比较好呢?我做真菌的,不知道用哪种内切酶比较好?
3、因为是第一次做,身边没人做过,请问如何判断每步的效果呢?以及每步的注意事项有什么?
①cDNA的准备
②酶切
③连接
④预扩增
⑤选择性扩增
⑥电泳及切胶。

希望有经验的人帮忙指点,不甚感激。

[ Last edited by hc1027 on 2012-4-14 at 15:47 ]
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小松果2012

银虫 (正式写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by xiaoxiong520 at 2012-05-08 10:14:06
内切酶NEB的比Fermentas的好些,我们用的是Fermentas的;
每步的检测:
①cDNA的准备 :RNA的质量很重要,是关键,合成第一链cDNA,之后合成第二链cDNA;检测反转录结果的话:取合成的第二链cDNA产物做PCR扩增内参 ...

请问一下,你合成第一链cDNA,就直接用的反转录吗?用的什么酶呢?
16楼2014-10-30 11:46:03
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hc1027

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by foxmygod at 2012-04-22 02:28:04:
建议用NEB的酶

fermentas的可以不

neb的很贵吧
5楼2012-04-22 09:16:43
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foxmygod

银虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by hc1027 at 2012-04-22 09:16:43:
fermentas的可以不

neb的很贵吧

你的用量很大么?
6楼2012-04-24 22:00:10
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hc1027

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by foxmygod at 2012-04-24 22:00:10:
你的用量很大么?

应该不会太大吧  样品不是很多。
满足cdna-aflp需要即可
7楼2012-04-24 22:39:27
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