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[求助]
Real-Time PCR加样过程中的那些细节
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急求各位高手哥哥姐姐帮忙啊 做实时荧光定量PCR，做扩增效率的曲线R2如何才能达到0.99以上，加样过程中有哪些细节需要注意的，使用枪的过程中又有哪些需要注意的，各位高手指点下吧，每次做出来的曲线基本都不好，愁死我了啊 |
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 real time-pcr | QPCR 问题简答 |
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孙启亮
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【答案】应助回帖
★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 哪有，很专业的说 2012-04-11 13:57:57
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核, 哪有，很专业的说 2012-04-11 13:57:57
| 一楼专家解释的已经很完整了。人家很专业，咱没法比，但是我的小经验还是送给你吧。感觉你的问题不是出在污染这一块，而是稀释的时候没做好，导致Ct值变化不呈现一定的规律性。由于八排连管容量小，加之你的体系少，这样就产生一个问题，就是你在稀释的时候液体由于受管底表面张力和静电的作用而不能很好的流动，这就是导致稀释不好的真正原因。这种缺陷对低拷贝基因的影响尤其大。解决方法是稀释的时候推干净模板的时候赶紧换枪头，因为枪头外围也会粘连上一个浓度梯度的模板，不换会产生很大影响。稀释的时候不要用枪头反复吹打，几次就可以了。然后轻微的涡旋一下，因为剧烈的涡旋可能会对体系产生影响。最后实在不行的话，换荧光，多尝试一下 |
3楼2012-04-11 13:08:48