24小时热门版块排行榜    

查看: 2034  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

[求助] 原核表达の不可思议的重组

各位师兄师姐请帮我分析下:我做一个原核表达目的基因连在T载体上进过英俊公司测序成功,能找到目的片段,接着双酶切连接,酶切为双酶切时间4h,连接16℃过夜,跳单克隆,进过菌落pcr有目的片段的送检,但是检测结果出其意料,尽然为意外一个载体的T载体连接序列。
解释:我做了两个不同载体的原核表达,目的序列一样,只是设计的引物前面酶切和保护碱基不同,在这次重组测序结果出来时我很奇怪的发现,A载体重组的序列尽然为B载体与T载体的序列,这是什么原因?之前A.B载体连在T载体上测序结果都是对的。载体提取的质粒以及酶切都很正常。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
嗯,手上做错了吧,重做,反正T载体还有啊,非常有可能你自己记错了。再仔细检查吧。
6楼2012-04-07 21:49:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
表述不是很清楚,可能是你在工作中某个环节弄错了,貌似不是重组的事

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2012-04-07 11:18:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weizhe34

至尊木虫 (职业作家)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by panda73 at 2012-04-07 11:18:06:
表述不是很清楚,可能是你在工作中某个环节弄错了,貌似不是重组的事

就是说,表达了两个载体,他们的区别只是酶切和保护碱基不同,在连到T载体上时测序是正确的,后来经过双酶切和连接,对菌落pcr有目的条带的进行测序,发现其中一个重组的测序结果为另外一个片段与T载体连接的序列,不是重组的目的序列!!!
4楼2012-04-07 12:26:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

to-be

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
还是不太明白楼主的意思,最合理的解释就是中间某个环节污染了。其实做分子实验没有必要这么细究错在哪里,从头重做一次就行了,提高效率。
生活是面镜子~
5楼2012-04-07 13:24:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的? +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-09-02 00:19 by xiangy672
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +4 瞬息宇宙 2026-08-31 4/200 2026-09-01 14:58 by jiaoxg
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
信息提示
请填处理意见