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我是驴

金虫 (小有名气)

[求助] 破细菌细胞壁时冻融时间以及温度的选择

各位虫友请问一下大家在提取细菌DNA时，假如用到冻融法的话，冻融时间以及温度多选择多少？
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努力向前
1楼2012-04-06 22:19:30
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fxgowen

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-08 09:00:50
4°C 下离心细胞培养液，用冷PBS 洗3 次，加入细胞裂解液在液氮环境中
快速反复冻融三次，13000rpm 冷冻离心后取上清。然后四倍体积冷丙酮沉淀蛋白并洗涤沉淀两次去除色素等杂质，冷冻保存备用
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2楼2012-04-07 19:05:59
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我是驴

金虫 (小有名气)
★
zhang8826857: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-08 10:39:16
引用回帖:
2楼: Originally posted by fxgowen at 2012-04-07 19:05:59:
4°C 下离心细胞培养液，用冷PBS 洗3 次，加入细胞裂解液在液氮环境中
快速反复冻融三次，13000rpm 冷冻离心后取上清。然后四倍体积冷丙酮沉淀蛋白并洗涤沉淀两次去除色素等杂质，冷冻保存备用

假如我不用液氮的话，又没有别的好一点的冻融方法哈。
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努力向前
3楼2012-04-08 09:12:50
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molecula

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我是驴: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-04-08 23:52:47
我的建议是
不用液氮，直接把细胞放进超低温冰箱，-80°
然后再拿出来沸水浴或者温水浴，当温度上升至水温时，再放回超低温。
这种方法在提取胞内产物时，效果一般不错。
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4楼2012-04-08 23:30:08
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进步一点点

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.用液氮比较快，使用的时候还要根据需要考虑是否要同时研磨。
2.不用液氮的话那只能在冻和融的状态间来回切换了，但是要速冻效果才好，具体数值要通过实验确定一下。
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科研穷三代，读博毁一生
5楼2012-04-09 00:14:39
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大米草

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我是 液氮-温水浴反复冻融三次 普通的低温冰箱效果不太好 而且比较慢
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我要的幸福
6楼2012-04-09 09:09:32
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dasheng1980

铁杆木虫 (知名作家)

大圣

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
液氮小试验肯定是好用的，但到大规模生产就不太现实了，我认为-80度可以试一下！
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dasheng1980
7楼2012-04-09 12:57:18
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