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dfm1987

新虫 (初入文坛)

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[求助] PBI121载体转化拟南芥，Tail-PCR扩增整合位点侧翼序列，为何只扩增得到载体部分序列？已有1人参与

我用热不对称方法扩增PBI121载体转化拟南芥得到的转化子的T-DNA整合位点侧翼序列；上游简并引物和下游特异性序列（RB区域）都是别人文献当中用过的，但是第三轮引物扩增的结果1000bp左右，经测序结果验证依然是PBI121的序列（RB区域上游）。我一直以为PBI121的整合特点是从RB和LB区域断开，整合到植物基因组中，但是我扩增出的结果又好像不是。求解，请各位大侠帮帮忙！还有一般大家是用哪种方法扩增T-DNA整合位点侧翼序列的？

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1楼 2012-04-05 16:35:06

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夜卧听风吹雨

新虫 (初入文坛)

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专业: 植物生理与生化

引用回帖:

11楼: Originally posted by 虫子火箭兵 at 2013-05-10 11:17:21
我目前也遇到了同样的问题，第三轮特异条带大概是3kb,但是没有植物基因组的信息，都是载体信息，也是RB外侧基因，有些文献报道可能是骨架确实是插入到植物染色体中，可以根据已知的序列继续设计引物TAIL，...

你好，请问你后来问题解决了吗？我现在也遇到这个问题，是载体骨架也插入到植物基因组中去了吗？

发自小木虫Android客户端