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天鸟

木虫 (正式写手)

[求助] 连接转化出现很多微小的菌落已有1人参与

首先我的PCR产物经过纯化,纯化DNA的图还是比较亮的。我连接的片段是400BP ,我连接的体系是:4微升DNA,1微升载体19-t,和solution I 5微升,在16度连接了3小时,图AMP+的平板后培养12小时发现菌落的大小不一致,大的菌旁边很多很小的菌落,菌落PCR验证发现阳性率只有50-70%,而且挑菌的时候也很不顺利,我挑的相对大些的菌落时,旁边就有小菌落。我这个重复做了两次,结果都差不多。平板也做了两批,也没有区别
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快乐生活,我快乐
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wanglei512

金虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 天鸟 at 2012-04-02 09:07:09:
问题是我要建库用的,这样的结果去建库感觉不是很好

阳性率低可能是感受态的问题,感受态效率好了,阳性率就高了。周围长出小菌,是培养的时间太长了,菌落差不多大小的时候,在4°冰箱放置上1h左右,蓝白斑非常明显。
9楼2012-04-03 17:21:53
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