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天鸟

木虫 (正式写手)

[求助] 连接转化出现很多微小的菌落已有1人参与

首先我的PCR产物经过纯化,纯化DNA的图还是比较亮的。我连接的片段是400BP ,我连接的体系是:4微升DNA,1微升载体19-t,和solution I 5微升,在16度连接了3小时,图AMP+的平板后培养12小时发现菌落的大小不一致,大的菌旁边很多很小的菌落,菌落PCR验证发现阳性率只有50-70%,而且挑菌的时候也很不顺利,我挑的相对大些的菌落时,旁边就有小菌落。我这个重复做了两次,结果都差不多。平板也做了两批,也没有区别
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快乐生活,我快乐
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

amp换cb对卫星菌落没用的,就是热稳定性好点,amp长卫星菌落关键是bla是个分泌蛋白,并且只有分泌了才起作用,所以无论AMP/CB都会被降解。
13楼2013-07-01 02:08:08
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