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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western blotting 内标差距明显，问题出在哪啊，各位好心人帮忙解答一下啊
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yueliangwan

铁虫 (小有名气)

[求助] western blotting 内标差距明显，问题出在哪啊，各位好心人帮忙解答一下啊

western blotting 内标（β肌动蛋白）差别明显，问题出在哪啊，各位好心人帮忙解答一下啊
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1楼2012-04-01 08:58:30
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yueliangwan

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by highjmq at 2012-04-01 11:05:02:
首先，做western之前你的蛋白有没有用BCA或者其他类似的方法测过浓度？
接下来是上样是不是准，还有抗体孵育的时候是不是摇晃均匀。是不是stripe的时候没做好，最后显色的时候是不是把显色剂滴均匀了也会有影响。 ...

谢谢啦，可是我做了两次，都是一样的结果。
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3楼2012-04-01 15:19:10
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highjmq

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+2, 鼓励交流~欢迎常来啊 2012-04-01 18:00:23
首先，做western之前你的蛋白有没有用BCA或者其他类似的方法测过浓度？
接下来是上样是不是准，还有抗体孵育的时候是不是摇晃均匀。是不是stripe的时候没做好，最后显色的时候是不是把显色剂滴均匀了也会有影响。所以需要一步一步排除的，希望对楼主有帮助
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2楼2012-04-01 11:05:02
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼上所说的还是比较全的，如果还是出现这种问题，我觉得可能是内参选择的不合适，应该换一下内参，也就是说你的刺激因子对内参是有影响的
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4楼2013-02-21 16:40:57
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