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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 同一引物，RNA为模板没扩出条带，DNA为模板扩出来了，说明了什么问题？
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敏敏8305

铜虫 (初入文坛)

[交流] 同一引物，RNA为模板没扩出条带，DNA为模板扩出来了，说明了什么问题？ 已有10人参与

同一引物，RNA为模板没扩出条带，DNA为模板扩出来了，说明这个基因在植物体内不表达吗？
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My heart will go on!
1楼 2012-03-31 16:40:26
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原野漫漫

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★
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西瓜: 金币+2, 确实！ 2012-04-01 17:51:07
西瓜: 回帖置顶 2012-04-01 17:51:09
本帖内容被屏蔽
3楼2012-03-31 19:30:22
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励帮助解答问题！ 2012-03-31 18:35:02
嗯......................
做CDS区克隆吗？还是其他？
如果是前者用gDNA能扩出来，用cDNA扩不出来的话可能是反转录的问题
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Let God do with it as He wills
2楼2012-03-31 17:29:09
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bbwalkman

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
RNA是DNA转录时经过了内含子剪接来的啊，它和cDNA对应，所以你同一引物在RNA中也有可能P不出来啊
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4楼2012-03-31 20:01:54
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普通回帖

yglky

金虫 (正式写手)
★
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肯定扩不出来，建议楼主好好学习下分子生物学知识
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5楼2012-03-31 21:31:35
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)
楼上正解

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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我就是我
6楼2012-04-01 00:15:33
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cnliu51

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
出现这一问题要分析两方面，第一，RNA的表达是有组织差异的，在某一组织中表达，可能在另一组织中不表达。第二，DNA的序列要比RNA丰富许多，一对引物扩增出来产物最好通过测定需验证，避免单引物扩增之类的事情发生。
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7楼2012-04-01 06:32:56
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ding218

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应该根据cDNA设计引物，如果出现楼主所说的情况，基本可以判定是不表达
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8楼2012-04-01 06:35:15
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敏敏8305

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-31 17:29:09:
嗯......................
做CDS区克隆吗？还是其他？
如果是前者用gDNA能扩出来，用cDNA扩不出来的话可能是反转录的问题

我是想看这个基因的表达量，是根据NCBI上下的mRNA序列设计的引物，我同时扩了几个基因，其他的都扩出来，就这一个没扩出来，要是反转录有问题，不可能一批样品都有吧
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My heart will go on!
9楼2012-04-01 09:10:37
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敏敏8305

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原野漫漫 at 2012-03-31 19:30:22:
一种原因可能如一楼所说，其次，设计引物的时候，是从CDNA上设计的还是对应的基因组DNA，如果仅仅是从基因组上设计，可能存在跨内含子问题。

是从cDNA上设计的
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My heart will go on!
10楼2012-04-01 09:11:12
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