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关于α葡萄糖苷酶抑制活性的实验
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| 最近做一个中药的α葡萄糖苷酶抑制活性的实验,先做了一下空白对照,想摸索一下条件,实验如下,0.1M的磷酸盐缓冲液(pH6.8)60微升,α葡萄糖苷酶(1U/mL)20微升,37度孵育10min,加入pNPG(10mM/L)20微升,37度反应10min后加入30微升0.1M的Na2CO3终止反应,放置室温,405nm下测定吸光度,结果,吸光度很低,0.05左右。我试图加大酶的量,可是还是0.05左右。后来,我把pNPG的浓度提高到30mM时(事实上已经有很多不溶解了),吸光度达到0.2。我看文献中用5mM或10mM的pNPG的居多,现在不知道我的问题出在哪里,有没有做过这个实验的请指导一下,多谢了,金币多多送。另外,α葡萄糖苷酶的活力怎么测定。谢谢了 |
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