24小时热门版块排行榜    

查看: 2660  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

狼在身边

木虫 (小有名气)

[求助] 关于RT-PCR的众多细节

我提取的是细菌的RNA,浓度在500ng/ul左右,但纯度很低,260/280只在1.6-1.7之间,请问这样的RNA能用吗,感觉细菌的RNA的260/280好像都很低,没有组织和植物的RNA那么好。用这样的RNA反转录之后的荧光PCR效果也不错,现在就很纠结,这种RNA纯度能用吗,请问大家提取的细菌RNA纯度都咋样,我提取RNA的试剂是TAKARA的。
   再有一个现象,提取RNA过程中添加异丙醇离心后没有RNA沉淀,后续乙醇洗脱时心里很虚。请问大家遇到过这样的问题吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

狼在身边

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wtyyyyy1988 at 2012-03-28 12:58:06:
紫外分光测的都不是很准的,关键看你跑的RNA电泳怎么样,电泳上跑的好的话就没什么大问题,不要去在意紫外测的,如果有DNA污染就用Dnase 1c处理下。
没有沉淀是正常的,不要发虚,吸取的时候小心点就OK啦,但是最 ...

谢谢。我用的是微量核酸测定仪测量的260/280,测完心就凉了,就没有跑电泳。
6楼2012-03-28 20:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-03-28 15:07:43
紫外分光测的都不是很准的,关键看你跑的RNA电泳怎么样,电泳上跑的好的话就没什么大问题,不要去在意紫外测的,如果有DNA污染就用Dnase 1c处理下。
没有沉淀是正常的,不要发虚,吸取的时候小心点就OK啦,但是最后你一定要跑个电泳看看啊,千万不要只测紫外而不跑电泳,两者结合最好!
GOOD luck!
我就是我
2楼2012-03-28 12:58:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
RNA微量,所以即使看不到沉淀,但是在乙醇洗涤的时候会看见的。我也有心虚的时候,但是在洗涤的时候总是能看见RNA所以现在也就不心虚了
3楼2012-03-28 14:45:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huang200669

新虫 (初入文坛)

我以前试过,用260/280是2.0、1.8、1.7的RNA分别反转录做荧光,内参的CT值不一样,2.0的CT值是20,1.7的是28,我的是植物RNA。
4楼2012-03-28 16:15:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +3 瞬息宇宙 2026-08-31 3/150 2026-09-01 14:26 by Wei_ren
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见