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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切

请各位大侠帮帮忙,我做的是RACE,现在是扩5端,PCR之后,在750有带,然后进行回收,连接,转化到DH5α中,提质粒,酶切,下面是质粒-酶切电泳图,片段大小750左右,连的是PMD18-T载体,用的是Ecor Ⅰ和HIND Ⅲ 酶切位点,请问,我连接上了吗?为什么片段在500啊??




酶切-质粒电泳图
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by shaquila at 2012-03-25 12:07:22:
对的,测序回来找到引物就说明你连上了
恭喜你拉,5RACE很折磨人的

谢谢啦,5端还在折磨人ing
5楼2012-03-26 12:24:59
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小虫子MM: 金币+2 2012-03-26 12:25:42
lz 我们一般菌液pcr以后直接测序~~~
也许你的race产物优美且微点
2楼2012-03-24 21:09:21
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shaquila at 2012-03-24 21:09:21:
lz 我们一般菌液pcr以后直接测序~~~
也许你的race产物优美且微点

那我的酶切位点,得是我载体上有,race产物没有的吗?刚才我查了一下,我那个RACE上有ECORⅠ。
但是我3端测序回来了,找到了引物。
是不是我测序回来,找到我的2个引物,就说明我连接上了呢?
3楼2012-03-24 21:23:42
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小虫子MM: 金币+3 2012-03-26 12:25:30
对的,测序回来找到引物就说明你连上了
恭喜你拉,5RACE很折磨人的
4楼2012-03-25 12:07:22
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