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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)

[求助] 双酶切

请各位大侠帮帮忙，我做的是RACE,现在是扩5端，PCR之后，在750有带，然后进行回收，连接，转化到DH5α中，提质粒，酶切，下面是质粒-酶切电泳图，片段大小750左右，连的是PMD18-T载体，用的是Ecor Ⅰ和HIND Ⅲ 酶切位点，请问，我连接上了吗？为什么片段在500啊？？




酶切-质粒电泳图
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1楼 2012-03-24 20:46:13
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shaquila at 2012-03-24 21:09:21:
lz 我们一般菌液pcr以后直接测序~~~
也许你的race产物优美且微点

那我的酶切位点，得是我载体上有，race产物没有的吗？刚才我查了一下，我那个RACE上有ECORⅠ。
但是我3端测序回来了，找到了引物。
是不是我测序回来，找到我的2个引物，就说明我连接上了呢？
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3楼2012-03-24 21:23:42
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小虫子MM: 金币+2 2012-03-26 12:25:42
lz 我们一般菌液pcr以后直接测序~~~
也许你的race产物优美且微点
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2楼2012-03-24 21:09:21
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shaquila

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小虫子MM: 金币+3 2012-03-26 12:25:30
对的，测序回来找到引物就说明你连上了
恭喜你拉，5RACE很折磨人的
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4楼2012-03-25 12:07:22
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小虫子MM

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by shaquila at 2012-03-25 12:07:22:
对的，测序回来找到引物就说明你连上了
恭喜你拉，5RACE很折磨人的

谢谢啦，5端还在折磨人ing
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5楼2012-03-26 12:24:59
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