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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA琼脂糖电泳该注意哪些问题？
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)

[交流] DNA琼脂糖电泳该注意哪些问题？

跑DNA琼脂糖电泳marker要么是w型要么是u型  该怎么办啊？
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1楼 2012-03-22 22:25:09
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weishengsu5

木虫 (正式写手)
胶做的不好吧
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2楼2012-03-23 07:13:42
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zhaoghit

金虫 (正式写手)
★
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检查你的试剂和电泳仪是否有问题，另一个就是电压不要太高。没别的原因了
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3楼2012-03-23 08:28:52
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhaoghit at 2012-03-23 08:28:52:
检查你的试剂和电泳仪是否有问题，另一个就是电压不要太高。没别的原因了

120v算不算高？
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4楼2012-03-23 12:02:29
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tantingting

金虫 (小有名气)
★
uuu555000: 金币+1 2012-03-24 21:00:09
引用回帖:
4楼: Originally posted by uuu555000 at 2012-03-23 12:02:29:
120v算不算高？

不高，正常都120V
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5楼2012-03-23 15:49:28
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跳跳鱼

木虫 (著名写手)
★ ★
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uuu555000: 金币+1 2012-03-24 21:00:20
胶和点样孔都有可能影响，造成你这样的结果
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6楼2012-03-23 19:52:23
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a731705125

银虫 (小有名气)
★
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我们跑电泳都300~400V，不知道学姐是用的什么buff，跑得还蛮好。
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7楼2012-03-23 21:24:24
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uuu555000

捐助贵宾 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 跳跳鱼 at 2012-03-23 19:52:23:
胶和点样孔都有可能影响，造成你这样的结果

做胶到底该注意哪些问题？
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8楼2012-03-23 21:52:25
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wtyyyyy1988

铁杆木虫 (正式写手)
★
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你配的是百分之几的胶？你说120V电压，那个还很正常。跑出不规则形的条带，就有可能是你的胶配得不够均匀。如果是浓度大的胶，一定要在微波里面煮到透明为止，最后还可以补加一些buffer
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9楼2012-03-24 11:28:54
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telomerase

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
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uuu555000: 金币+3 2012-03-24 21:01:24
胶一定要烧好，微波完最好立即拿起来晃晃匀，他那个东西容易结块。有时可以看下里面有没有小的颗粒，有的话说明琼脂糖没完全溶解。直到摇着就像里面是水的样子，一点杂质（小的白色颗粒）度没有才行。摇时注意点别烫着自己。
配角前把瓶子和梳子，槽子洗洗干净，以前的胶粘在在上面不好
电压不应该是问题，只要跑的过程中，你的buffer不发热就可以，除非你的电源不好忽高忽低的，或是你总在改他。
buffer，不行换点新的，时间长盐浓度会高

另外Maker用前可以甩一下，吸上面的，有的Maker可能会有杂质

[ Last edited by telomerase on 2012-3-24 at 21:08 ]
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10楼2012-03-24 20:05:57
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
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1. 胶的问题  没有融化完全，或者倒胶过晚，有部分凝固。
2. 缓冲液的问题   特别是TAE缓冲液比较容易失去缓冲作用，要经常更换，以前都是跑三次就换。
3. 电泳仪的问题  主要是电压，是否过高，是否恒定。
4. marker本身的质量问题  看别人也出现这种情况，验证一下是不是自己操作的问题。
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11楼2012-03-25 22:35:23
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