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简0516单

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 关于毕赤酵母表达

各位老师,请教一下,在做毕赤酵母表达时,转到比赤酵母里之后,做PCR鉴定时,能不能直接做菌落PCR?酵母菌的壁又特别厚,该怎么处理呢?
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啊Q精神

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
煮冻煮的方法,零下20冻,时间20-30min,煮5min,反复2-3次,上清做PCR
循环数要多,至少30-35吧,模板可以适当多加点。
7楼2012-03-20 12:10:31
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查看全部 23 个回答

墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
简0516单: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢帮助 2012-04-07 00:09:56
100°水浴5-10min 再立即放入-80冰箱 反复三次后  再用溶菌酶(最好用lyticase)处理  可以菌落PCR 不用酶处理也可能P出来

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

仕不可不弘毅,任重而道远
2楼2012-03-20 08:51:03
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
简0516单: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢帮助 2012-04-07 00:10:14
可以直接做菌落PCR的,不用前期处理也是可以P出来的,你只需要在设定PCR反应条件时95度维持时间稍微长一点就可以了

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2012-03-20 09:48:52
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简0516单

至尊木虫 (著名写手)

送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by whb21 at 2012-03-20 09:48:52:
可以直接做菌落PCR的,不用前期处理也是可以P出来的,你只需要在设定PCR反应条件时95度维持时间稍微长一点就可以了

非常感谢您的帮助,请问95℃大概维持多长时间呢?我现在用的是10min,没有P出来
4楼2012-03-20 11:12:03
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