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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 利用CHO进行分泌表达
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若然飞翔

新虫 (初入文坛)

[求助] 利用CHO进行分泌表达

Sample Text　　　　我想利用CHO细胞分泌表达一个膜蛋白，从上游构建开始，我该如何选择可以在CHO中进行高效表达的载体?如果使用pCDNA3.1,启动子，增强子我该如何处理？如何选择信号肽啊？刚开始接触，有太多不明白的地方了，请大家帮帮忙
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1楼 2012-03-19 16:38:21
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若然飞翔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-03-21 22:26:15:
我得理解：你只是想把该膜蛋白的胞外区分泌表达到培养基中，而不是表达完整的膜蛋白，对吗？
如果是这样，你可以用pCDNA3.1，没问题，只是表达量可能比较低。
比较经典的瞬时表达系统有两个，这两个瞬时表达系统 ...

完整的膜蛋白是有几个亚基组成的，我想要分泌表达的是其中的一个亚基，也是在膜上，我觉得膜蛋白分泌出去它的天然结构会发生变化，可能导致没有功能，但老板想要做，说是成功了可以制备抗体，我自己是一点底没有啊，希望你能对我的信号肽选择上再给些建议，非常感谢
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11楼2012-03-22 21:34:26
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酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
若然飞翔: 金币+2, ★有帮助 2012-03-20 08:36:50
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, Good! 2012-03-20 11:54:03
首先，完整的膜蛋白是不可能分泌表达的（你是指将膜蛋白表达在CHO细胞的细胞膜上吧？）。既然是膜蛋白，就用它自身的信号肽就好了。
表达时载体的确很重要，但也得分情况的:
如果你是想构建稳定的细胞株，那么你可以考虑用pcDNA3.1，也可以考虑用invitrogen的FlP-IN系统，更容易获得高表达细胞株；
如果是做瞬时表达，那么建议你用invitrogen的MembranePro™ Functional Protein Expression (FPE) System。
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2楼2012-03-19 21:36:01
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若然飞翔

新虫 (初入文坛)
还想再请教一下，我的老板的意思是去掉自身的信号肽，连入一段分泌信号肽完成分泌表达，可行么？还有就是pcDNA3.1是不是既可以用于稳定表达又可以用于瞬时表达啊，我是只瞬时表达在胞外检测到就可以，并且实验室有这个载体，我可以用么？
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3楼2012-03-20 08:41:10
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若然飞翔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 酶切专家 at 2012-03-19 21:36:01:
首先，完整的膜蛋白是不可能分泌表达的（你是指将膜蛋白表达在CHO细胞的细胞膜上吧？）。既然是膜蛋白，就用它自身的信号肽就好了。
表达时载体的确很重要，但也得分情况的:
如果你是想构建稳定的细胞株，那么你 ...

还想再请教一下，我的老板的意思是去掉自身的信号肽，连入一段分泌信号肽完成分泌表达，可行么？还有就是pcDNA3.1是不是既可以用于稳定表达又可以用于瞬时表达啊，我是只瞬时表达在胞外检测到就可以，并且实验室有这个载体，我可以用么？
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4楼2012-03-21 08:01:57
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