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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » DNA测定
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王寿梅

木虫 (小有名气)

[求助] DNA测定

请问DNA测定体系中一般要考察什么条件啊？
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团结互助
1楼 2012-03-18 20:40:55
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你要测定什么？是测序么？还是测浓度？
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2楼2012-03-19 08:38:52
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王寿梅

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2012-03-19 08:38:52:
你要测定什么？是测序么？还是测浓度？

想测浓度啊
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团结互助
3楼2012-03-19 14:58:40
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xstarsky

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王寿梅: 金币+2 2012-03-22 14:32:58
Spectrophotometry and fluorometry are commonly used to measure DNA concentration. Spectrophotometrycan be used to measure microgram quantities of pure DNA samples (i.e., DNA that is not contaminated by proteins, phenol, agarose, or RNA). Fluorometry is more sensitive, allowing measurement of nanogram quantities of DNA, and furthermore the use of Hoechst 33258 dye allows specific analysis of DNA.
1。Spectrophotometry    DNA concentration can be determined by measuring the absorbance at 260 nm (A260) in a spectrophotometer
using a quartz cuvette. For greatest accuracy, readings should be between 0.1 and 1.0. An absorbance of 1 unit at 260 nm corresponds to 50 μg genomic DNA per ml (A260 =1 ⇒ 50 μg/ml)*. This relation is valid only for measurements made at neutral pH, therefore, samples should be diluted in a low-salt buffer with neutral pH (e.g., Tris·Cl, pH 7.0). An example of the calculation involved in nucleic acid quantification when using a spectrophotometer is provided in “Spectrophotometric Measurement of Nucleic Acid Concentration”
1）If you will use more than one cuvette to measure multiple samples, the cuvettes must be matched.
2）Spectrophotometric measurements do not differentiate between DNA and RNA, so RNA contamination can lead to overestimation of DNA concentration.
3）Phenol has an absorbance maximum of 270–275 nm, which is close to that of DNA. Phenol contamination mimics both higher yields and higher purity, because of an upward shift in the A260 value.

2.Fluorometry  Fluorometry allows specific and sensitive measurement of DNA concentration by use of the fluorochrome Hoechst 33258, which shows increased emission at 458 nm when bound to DNA. This dye has little affinity for RNA, allowing accurate quantification of DNA samples that are contaminated with RNA.DNA standards and samples are mixed with Hoechst 33258 and measured in glass or acrylic cuvettes using a scanning fluorescence spectrophotometer or a dedicated filter fluorometer set at an excitation wavelength of 365 nm and an emission wavelength of 460 nm. The sample measurements are then compared to the standards to determine DNA concentration.
1）As Hoechst 33258 preferentially binds AT-rich DNA, use standards with a similar base composition to the sample DNA.
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4楼2012-03-19 17:29:28
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 王寿梅 at 2012-03-19 14:58:40:
想测浓度啊

DNA浓度范围大约多少？你是要确定一种方法来测定浓度，还是测了浓度好定量，进行下面的实验？
问个问题，要尽量把背景描述清楚啊，要不然俺们想帮你也有心无力
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5楼2012-03-20 09:01:30
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lys6827

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王寿梅: 金币+2 2012-03-22 14:33:09
DNA浓度测定的方法多了，有仪器可以测，最简单的就是紫外分光光度计，还有eppendorf分光光度计，其他的荧光定量之类的要贵一些
对了最便宜的是跑电泳根据与marker亮度相比较大致测定浓度，这是最早的相对定量，不过误差很大
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6楼2012-03-20 09:03:59
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小小鸽飞

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-08-25 19:20:51
你DNA用什么方法提取的呢？给你推荐个好方法吧，中国磁珠法提取DNA方法第一品牌——河南惠尔纳米科技公司，提取纯度高，操作简便，节省时间
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既然选择了远方，便只顾风雨兼程
7楼2012-03-21 10:08:53
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www21214

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
王寿梅: 金币+2 2012-03-22 14:32:44
yqbter: 金币+2, 鼓励发帖！ 2012-08-25 19:21:01
紫外分光光度计简便快捷，测260nm的吸光度值
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8楼2012-03-21 10:20:13
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fanjw1985
9楼2012-03-21 11:33:36
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wanglinlin9870

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
王寿梅: 金币+1, 谢谢 2012-03-22 14:33:25
DNA的浓度以碱基对的摩尔浓度计，用紫外可见分光度计测量DNA在260 nm的吸光度值A260。
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努力
10楼2012-03-21 21:31:58
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