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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] RNA电泳

各位,我的RNA电泳结果很差,是降解了吗?(最左边是生工的100bp DNA ladder)我是刚提完就跑的电泳,是提取过程中操作不当吗?

RNA电泳
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a731705125

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mahoumeimei(金币+1): 2012-03-12 20:05:42
小丹木木(金币+5): 鼓励应助 2012-03-13 10:30:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-12 15:00:57:
我提取用的枪头是买的一次性的,实验台和移液枪都喷了酒精了,实验过程中都带着口罩和干净手套,求教还有哪里可能没注意到啊?急!急!急!

转自生物秀http://www.bbioo.com/experiment/13-1223-1.html
1、RNase 是RNA制备的杀手
RNase酶非常稳定,是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活,但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。它广泛存在于人的皮肤上,因此,在与RNA制备有关的分子生物学实验时,必须戴手套。RNase的又一污染源是取液器。根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用DEPC配制的70%乙醇擦洗取液器的内部和外部,基本达到要求。取RNase-free的物品时必须戴手套。
2、塑料制品、玻璃和金属物品的处理
(a)塑料制品:尽可能使用无菌,一次性塑料制品。已标明RNase-Free 的塑料制品,如没有开封使用过,通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品,原则上都必须处理方可使用。处理方法如下:
(1)在玻璃烧杯中注入去离子水,加入DEPC使DEPC的终浓度为0.1%。注意:DEPC为剧毒物,活性很强,小心在通风柜中使用。
(2)将待处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中,注入DEPC水溶液,使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。
(3)在通风柜中室温处理过夜。
(4)将DEPC水溶液小心倒到废液瓶中,用铝箔封住含已DEPC水处理过的塑料制品的烧杯,高温高压蒸气灭菌至少30分钟。
(5)烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。
(b)玻璃和金属物品
250°C烘烤3小时以上。
6楼2012-03-12 18:55:20
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
mahoumeimei(金币+2): 2012-03-12 20:05:20
你提取的RNA量太低而且降解严重。正常RNA电泳应该有28s、18s、5s三条带,28s的带的亮度约是18s带的两倍,最低也得等同,一般提取情况下5s的带很少见。你的RNA基本都降解了,建议认真彻底处理提取用具及环境!
坚持就是胜利
2楼2012-03-12 12:29:14
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by karin at 2012-03-12 12:29:14:
你提取的RNA量太低而且降解严重。正常RNA电泳应该有28s、18s、5s三条带,28s的带的亮度约是18s带的两倍,最低也得等同,一般提取情况下5s的带很少见。你的RNA基本都降解了,建议认真彻底处理提取用具及环境!

我提取用的枪头是买的一次性的,实验台和移液枪都喷了酒精了,实验过程中都带着口罩和干净手套,求教还有哪里可能没注意到啊?急!急!急!
3楼2012-03-12 15:00:57
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karin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木(金币+2): 鼓励 2012-03-13 10:30:25
mahoumeimei: 金币+1 2012-03-27 11:28:42
引用回帖:
3楼: Originally posted by mahoumeimei at 2012-03-12 15:00:57:
我提取用的枪头是买的一次性的,实验台和移液枪都喷了酒精了,实验过程中都带着口罩和干净手套,求教还有哪里可能没注意到啊?急!急!急!

跑电泳的东西也是要处理的。我以前是用试剂盒提取的,所用的管子和枪头也都是买的去RNase的,把制胶的模具和电泳槽用DEPC处理,提取过程尽量迅速,效果还是不错的。你是提取的甚么的RNA呢?
    祝实验成功!
坚持就是胜利
4楼2012-03-12 17:08:26
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