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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 实时定量pcr使用的水
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pop_hjx_41

铜虫 (初入文坛)

[求助] 实时定量pcr使用的水

用的是Biorad IQ5的机器，用天根的SYBR Green试剂盒 想请问两个问题：
1 体系用的水说用超纯水 我们实验室的去离子超纯水系统好像不是太好 能不能用灭菌后的娃哈哈纯净水？
2 20微升的体系，用10uM浓度的引物和cDNA模板各多少量比较合适
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1楼 2012-03-10 22:49:37
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1 没问题
2 最好参考你所用试剂盒说明书要求,如果推荐体系是50微升,可以按比例缩小.
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-03-11 06:01:58
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mrna
3楼2012-03-11 09:15:51
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
上生工买HPLC的水 很便宜 一大瓶 有的用的啦
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4楼2012-03-12 10:03:32
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我用的是实验室自备的纯水，灭菌后分装使用，超纯水都没用
2uM的引物，20的体系我加2个ul    cDNA一个微升就行 不然太浪费
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也许似乎大概是，然而未必不见得。
5楼2012-03-12 13:57:38
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神经再生

铁杆木虫 (著名写手)
补充一下，应该是灭菌后的去离子水都可以的
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也许似乎大概是，然而未必不见得。
6楼2012-03-12 13:58:33
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物终浓度0.1～0.4uM均可，一般0.3uM。cDNA根据情况而定，最好先做个梯度稀释，看看哪种可以扩得好。
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何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
7楼2012-03-12 18:35:30
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