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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 植物组织中的ROS如何定量测定？
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我是帅男

铁虫 (正式写手)

[求助] 植物组织中的ROS如何定量测定？ 已有3人参与

用DCFH-DA如何定量测定，比如根中的ROS。要把ROS提取出来吗？求详细步骤
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1楼 2012-03-08 22:41:35
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vcvcvc

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我是帅男(金币+1): ★有帮助 的却是相对的，不过我要测组织的，不是细胞的。动物肝脏可以直接研磨，测定，但是植物没查到 2012-03-09 21:03:03
绝对定量很难，DCHF-DA是相对定量，染色后盯住一类细胞用confocal测荧光强度。
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3楼2012-03-09 07:45:43
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
我是帅男(金币+4): ★★★很有帮助 ROS的那个综述很有用，谢谢 2012-03-09 21:01:21
DCFH-DA是一种用于测定活性氧的荧光探针。DCFH-DA进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内总体活性氧的水平。
目前有很多公司生产DCFH-DA活性氧检测试剂盒，楼主可以购买试剂盒，根据说明使用。
另外，我附上了一份网上找的试剂盒说明和一篇关于ROS的综述，供楼主参考
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  • 附件 1 : S0033活性氧检测试剂盒.pdf
    • 2012-03-08 23:46:07, 142.94 K
  • 附件 2 : ROS.pdf
    • 2012-03-08 23:46:42, 442.57 K
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2012-03-08 23:48:25
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索宇楠

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
我是帅男(金币+1): ★有帮助 2012-03-09 21:06:02
可参照罗广华和王爱国(1990)的方法进行。
王爱国，罗广华.植物的超氧物自由基与经胺反应的定量关系[J].植物生理学通讯。
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加油！
4楼2012-03-09 13:25:58
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fl378

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2012-03-08 23:48:25
DCFH-DA是一种用于测定活性氧的荧光探针。DCFH-DA进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内总体活性氧的水平。
目前有很 ...

背景值是怎么去除的？包括哪些背景？另外，单位怎么处理比较好呢？有人用H2O2当做标准单位，来衡量测试组产生ROS的多少
我最近在做H2DCFDA，这两处还是始终不敢确定，希望大家多探讨和交流。真心感谢！
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5楼2012-06-11 04:30:49
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