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hejiansgbo

新虫 (小有名气)

[求助] 请问下,我该怎么样去调整我的梯度呢?

黄酮高效液相提取洗脱
我是做黄酮提取的,将原料用超声波辅助提取,温度60℃,提取液为60%乙醇,然后过滤,取滤液过0.45um膜,流动相A甲醇,B0,1%甲酸。梯度洗脱0min 5%A  10min 10%A   20min 40%A  25min 40%A  30min 60%A 35min 60%A  45min 90%A  47min 100%A 60min 100%A ,这样跑出来的峰只是在三分钟左右有一个峰(有点像溶剂峰,但是峰很高,后面还有小峰,没分离开)还有就是在50-60分钟有一些峰,请问下,我该怎么样去调整我的梯度呢?
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kkbyb

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


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豆哥(金币+1): 谢谢参与 2012-03-07 09:13:47
前面的是大极性物质,估计您都5%了,看来是分不开了,后面的可以直接在10分钟提高到45%以上,从这个平台开始梯度,这个分析方法放弃前面的,直奔后面的,换用C8的柱或者CN的柱去试试前面的有没有改善,如果没有就舍了吧,生药就是这样,出峰都是一簇一簇的,挤在某一时间段出一堆,然后中间什么也没有
2楼2012-03-06 16:07:26
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


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豆哥(金币+1): 谢谢参与 2012-03-07 09:13:54
1、柱温可设置低一点,譬如40℃,延缓保留时间。
2、跑出来的峰只是在三分钟左右有一个峰——也就是说,3min之后基本没有出峰,后面的梯度还有意义吗?是否可以考虑分析方法是否合适?
3、0.1%甲酸,酸度是否太高了??
守候在风中的宁静。
3楼2012-03-06 16:10:02
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xiaoxiao_2006

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
同意2楼的意见,你的样品主要成分是60%乙醇提取出来的,梯度初始浓度可以提高一些,不然3-50min之间太浪费了。不知道你的50~60min之间的峰分离的怎么样,你可以先只设置一个梯度(比如0-30min,A45%-100%)看一下主要成分的峰分布情况,再针对个别分离不好的峰调整梯度。建议摸索条件的过程中,不要一开始就设置那么细的梯度。
一切都很好,只是我很想念你,以致于在转身的时候经常左脚绊到右脚!
4楼2012-03-06 17:17:44
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lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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同意三楼的说法,摸索条件没有必要设置那么细的梯度,一来浪费,二来既然是摸索条件就要从最简单的开始。
5楼2012-03-06 18:05:46
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