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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 糖蜜总糖测定能用DNS方法吗？
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sero

铁虫 (正式写手)

[求助] 糖蜜总糖测定能用DNS方法吗？ 已有1人参与

各位大仙！！！！！！！！！！！！！
糖蜜总糖测定能用DNS方法吗？
除了菲林试剂，有没有更快捷的方法？由于发酵液样比较多，个人觉得婓林方法太繁琐，又不好控制，请各位支支招！！！！！！！！！！！
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1楼 2012-03-03 23:02:18
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+7, MicEPI+1): 非常好 2012-03-06 09:37:06
1、糖蜜是制造甘蔗榨糖剩余的废水，里面成分复杂，主要含有蔗糖，至于麦芽寡糖之类的含量就很小了。
2、DNS只能够测定还原糖，蔗糖是由一份子葡萄糖和一分子果糖结合成的，不具有还原性，DNS法不能测定，如果用DNS法测定总糖，需要先水解，而所有测定方法都需要水解这一步骤，使用DNS法不会使得测定过程更加繁琐。
3、DNS法相对于菲林法，具有简单快捷的特点，而且菲林法需要判断滴定终点，需要熟练判断颜色变化（我至今分不清什么是砖红色），DNS法不容易出错。
4、本底颜色的扣除是所有测定方法都要做的，不只是DNS法，而且也不用担心本底会影响测定的显色，因为DNS法可以测定0.1mg/ml的葡萄糖，而蔗糖的糖含量达到35%，到达能够用DNS法来测定的浓度需要大量稀释，本底不会太大。

综上所述，我觉得先水解彻底之后可以用DNS法来测定总糖。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2012-03-04 23:09:07
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
15楼: Originally posted by 老小男孩 at 2013-10-24 18:55:55
你好，我想问一下你的DNS法可以测定0.1mg/ml的葡萄糖是怎么来的，DNS法的检出限是多少你知道是多少吗，有没有相关文献，谢谢...

你好，我是自己做了葡萄糖标准曲线之后得知的，但没有查找文献，谢谢。
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16楼2013-10-24 19:16:58
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

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17楼: Originally posted by 老小男孩 at 2013-10-24 19:33:31
非常感谢，测葡萄糖肯定是要做标曲的，关键是还没有一个大致的线性范围，方便告诉我你的测量范围吗，或者是你做标曲时定容后的葡萄糖浓度，非常感谢...

我是用酶标仪来测吸光度的，具体OD值可能会和操作不同有关，你自己做一次看看。
糖蜜总糖测定能用DNS方法吗？
图片1.png
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18楼2013-10-24 20:33:13
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
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19楼: Originally posted by 老小男孩 at 2013-10-25 23:52:19
非常感谢...

祝顺利
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20楼2013-10-26 00:03:57
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
引用回帖:
22楼: Originally posted by sero at 2013-12-23 08:44:30
大侠，求助~~~
现打算用淀粉 在淀粉酶作用下 水解得到总糖（即总糖，包括麦芽糖和葡萄糖等）想计算1g淀粉每h经此酶水解得到多少g总糖（以葡萄糖计），如何计算
现已知 酶活单位1000u/g ，
求助高手帮我计算下！ ...

还以为你在不需要下车间的部门工作，本来女的就少，还不好好对待，这个厂真是的。

如果是你买来的酶，酶活力单位就是厂家标示出来的，实际上可能会有偏差，不能全信。

从现有文献来看，如果是alpha淀粉酶，是不可能将淀粉完全水解成葡萄糖的，所以如果是纯的酶，1克淀粉水解之后无论怎么算都少于1克。但是看你给出的这个酶活力单位，我觉得可能是粗酶，微生物发酵得到的酶直接制作成的粗酶。微生物一般都不会只含有一种淀粉酶的，所以就很可能能够将淀粉完全水解成葡萄糖，则算出来应该大于1克，可能是1.1克。
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23楼2013-12-23 09:11:53
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
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24楼: Originally posted by sero at 2013-12-23 13:43:41
嘻嘻~谢谢哥的详细回答~~~~我的是中温淀粉酶，酶活是1000u/g 他酶活定义是 每h每g酶转化淀粉的量叫一个单位，这样理论上来说，那水解1h 也就是有1000g淀粉被水解了，对吗？但是淀粉有多少水解成糖（即总糖，一般以 ...

6个葡萄糖形成一个螺旋，可以络合一个碘原子形成蓝色络合物，所以我猜测那个厂家是用碘量法来测定淀粉的量的，大概是不显色就可以当做是降解的终点的。一摩尔葡萄糖和一摩尔麦芽糖都是有一个还原端，但是麦芽糖还隐藏着一个还原端是不能被DNS法测定得到的。一般alpha淀粉酶都不能将麦芽糖水解成为葡萄糖，加上又不能肯定你买到的这个酶里面有糖化酶，所以不一定能够以葡萄糖计。
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25楼2013-12-23 23:04:05
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶
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26楼: Originally posted by sero at 2013-12-24 08:37:15
哎~~哥哥，我都被你弄糊涂了~~~我就想问   我现在能估算理论上  底物1000g淀粉 1g 酶  最佳条件下反应1h 上我反应体系中有多少还原性糖吗？...

很难估计，因为alpha淀粉酶绝对不可能将淀粉完全降解为葡萄糖，至于能降解成什么样的产物，不同的酶液不同。有的能降解3糖，则能将淀粉降解为葡萄糖和麦芽糖；有的不能降解3糖，则能将淀粉降解为葡萄糖和麦芽糖和3糖。从你给出的商品的酶活力，我推断你的是粗酶，但是粗酶中有多少糖化酶也不知道，所以能不能将alpha淀粉酶降解剩余的2、3糖降解为葡萄糖也不知道。即使也含有足够高的糖化酶，但糖化酶也存在产物的反馈抑制效应，你买到的粗酶中的糖化酶受反馈抑制的程度为多大，不知道。所以我认为你的估算存在难度，当然，换成我来估算，应该也一样是估算不出的。
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27楼2013-12-24 14:57:47
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29楼: Originally posted by sero at 2013-12-25 09:18:33
其实我是这样的，我想让我的反应体系中经过一段时间后残留一定浓度的糖，所以我想过能推断估计下淀粉每h转化成糖有多少，来反推我应该在初始加多少淀粉，有办法估计添加量吗？哥哥...

“推断估计下淀粉每h转化成糖有多少”我认为有难度，因为随着反应时间的延长，酶会在反应所用的温度下失活，因为酶的测定中也有温度耐受性的这个性质的，你查一下关于酶的纯化的文章，大多数都是有的。比如说某个淀粉酶的最适作用温度是80度，在75度下保温1小时就会失去一半的活力，那么在75度催化的时候也要考虑耐受性的问题。同理，pH耐受性的问题也是需要考虑的。因为不知道你手中的酶性质如何（也包括降解的底物含有什么糖，受产物的反馈抑制有多严重），所以我觉得你需要做预备实验。例如这一篇文章，你看延长催化的时间，产物也不是成倍数增加的。虽然我觉得阿三在放卫星，但酶的性质也是相似的。
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30楼2013-12-25 22:41:40
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生物大分子降解酶
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31楼: Originally posted by sero at 2013-12-26 12:14:50
谢谢~~~哥哥~~看来还得摸索下~~~试一试梯度是把~~每隔段时间取样测总糖含量~是把？...

对，因为不确定的东西太多了。
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32楼2013-12-26 15:33:47
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33楼: Originally posted by sero at 2013-12-30 13:55:43
谢谢~哥~~~嘻嘻...

努力吧，嗯
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