应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于引物设计
51/1返回列表
查看: 2505  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

优秀版主优秀版主

[求助] 关于引物设计

我的EYFP荧光质粒克隆测序完后发现阅读框移动了，最后导致基因定位错误。

后来发现空载体上MCS插入区上少1个bp的密码子。然后被催的引物的从新设计，就是想问问谁有没有经验。。。在设计的引物酶切位点和cDNA起始序列ATG之前加1个A，是否可行。加1个bp够用吗。。。

[ Last edited by 1949stone on 2012-3-1 at 21:46 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
开花可要欣赏，然后就去远行；唯有不等花开，才能记得花红。
1楼 2012-03-01 02:32:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 听雪看山 at 2012-03-01 19:09:22:
如果 那1个bp补A应该没问题吧

主要就是补上这个缺失的不要引起新的终止子，和新的启动子，是吧。。。是否还有什么禁忌？？

既然YFP在基因的5‘端，只要注意不产生终止密码子即可。
赞一下 回复此楼
何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
8楼2012-03-01 22:43:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 鼓励应助交流 2012-03-01 09:53:44
听雪看山(金币+10): ★★★很有帮助 谢谢 2012-03-01 19:27:22
如果你的基因克隆到载体上表达时，用的是自带的起始密码子ATG，那么你只要保证克隆的目的基因的读框是完全正确（从ATG起始密码子后没有碱基的缺失导致读码框改变）。
如果你的基因克隆在载体上，利用的是载体上的起始密码子，那你就要注意克隆后，你的目的基因的读框必须与载体上的ATG读框保持一致。
总之，在ATG之前加碱基，没有用
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-03-01 08:24:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励 2012-03-01 17:06:08
听雪看山(金币+25): ★★★很有帮助 谢谢 2012-03-01 19:07:34
楼主的意思可能是：本来根据质粒图谱对好了阅读框，但结果空载的MCS缺了1bp导致移码。现在还是要用这个缺了1bp的空载，所以设计引物的时候在ATG前额外补上1bp，使阅读框对好。

如果是我想的这样，完全没问题。
赞一下 回复此楼
何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
3楼2012-03-01 13:06:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

听雪看山

木虫 (职业作家)

西游家族之T所长

优秀版主优秀版主
引用回帖:
3楼: Originally posted by hongqifei at 2012-03-01 13:06:04:
楼主的意思可能是：本来根据质粒图谱对好了阅读框，但结果空载的MCS缺了1bp导致移码。现在还是要用这个缺了1bp的空载，所以设计引物的时候在ATG前额外补上1bp，使阅读框对好。

如果是我想的这样，完全没问题。

如果 那1个bp补A应该没问题吧

主要就是补上这个缺失的不要引起新的终止子，和新的启动子，是吧。。。是否还有什么禁忌？？
赞一下 回复此楼
开花可要欣赏，然后就去远行；唯有不等花开，才能记得花红。
4楼2012-03-01 19:09:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-28 17:09 by winsaint
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +11 Kittylucky 2026-08-27 12/600 2026-08-28 16:26 by lyxiaomc
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +3 德尚中行 2026-08-27 3/150 2026-08-28 15:24 by rongshuxia
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭